Kit CHO HCP ELISA

Um método ELISA imunoabsorvente de uma etapa é usado neste ensaio.Amostras contendo CHOK1 HCP reagem simultaneamente com anticorpo de cabra anti-CHOK1 marcado com HRP e anticorpo anti-CHOK1 revestido na placa ELISA, formando finalmente um complexo sanduíche de anticorpo de fase sólida-anticorpo marcado com HCP.O antígeno-anticorpo não ligado pode ser removido lavando a placa ELISA.O substrato TMB é adicionado ao poço para reação suficiente.O desenvolvimento da cor é interrompido após a adição da solução de parada, e a DO ou valor de absorbância da solução de reação a 450/650 nm é lida com um leitor de microplacas.O valor de DO ou valor de absorbância é proporcional ao conteúdo de HCP na solução.A partir disto, a concentração de HCP na solução pode ser calculada de acordo com a curva padrão.

Aplicativo

Este kit é usado para detectar quantitativamente o conteúdo de resíduos de proteína da célula hospedeira CHOK1 em amostras.

Ccomponentes

Equipamento necessário

Armazenamento e estabilidade

1.Transporte a -25~-15°C.

2.As condições de armazenamento são mostradas na Tabela 1;os componentes 1-2 são armazenados ≤–20°C,5-6 são armazenados à temperatura ambiente,3、4、7、8 são armazenados em 2-8℃;o período de validade é de 12 meses.

Parâmetros do produto

1.Sensibilidade: 1ng/mL

2.Faixa de detecção: 3- 100ng/mL

3.Precisão: CV intraensaio≤ 10%, CV interensaio≤ 15%

4.Cobertura de profissionais de saúde: >80%

5.Especificidade: Este kit é universal, pois reage especificamente com CHOK1 HCP independente do processo de purificação.

Preparação de reagentes

1.PBST 0,05%

Tomar 15 ml de 20×PBST 0,05%, diluído em ddH₂O, e completou até 300 ml.

2.1,0% ASC

Retire 1g de BSA do frasco e dilua em 100 ml de PBST 0,05%, misture bem até dissolver completamente e armazene entre 2-8°C.O tampão de diluição preparado é válido por 7 dias.Recomenda-se preparar conforme necessário.

3.Solução de detecção 2μg/mL

Tome 48μL de 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP e dilua em 11.952μL de BSA a 1% para obter uma concentração final de solução de detecção de 2μg/mL.

4.CQ e preparação de padrões CHOK1 HCP

Tabela: Preparação de CQ e Padrões 

Procedimento de ensaio

1.Prepare os reagentes conforme indicado em “Preparação de Reagentes” acima.

2.Coloque 50μL de padrões, amostras e CQs (consulte a Tabela 3) em cada poço e, em seguida, adicione 100μL de solução de detecção (2μg/mL);Cubra a placa com selante e coloque a placa ELISA no termomixer.Incubar a 500 rpm, 25±3°C por 2 horas.

3.Inverta a microplaca na pia e descarte a solução de revestimento.Pipetar 300μL de PBST 0,05% em cada poço para lavar a placa de ELISA e descartar a solução, e repetir a lavagem 3 vezes.Inverta o prato sobre uma toalha de papel limpa e seque.

4.Adicione 100μL de substrato TMB (ver Tabela 1) a cada poço, sele a placa ELISA e incube no escuro a 25±3℃ por 15 min.

5.Pipete 100μL de solução de parada em cada poço.

6.Meça a absorbância no comprimento de onda de 450/650 nm com leitor de microplacas.

7.Analise os dados pelo SoftMax ou software equivalente.Trace a curva padrão usando um modelo de regressão logística de quatro parâmetros.

Exemplo de curva padrão

NOTA: Se a concentração de HCP na amostra exceder o limite superior da curva padrão, ela deverá ser adequadamente diluída com tampão de diluição antes do teste.

NOTAS

A solução de parada é ácido sulfúrico 2M, manuseie com cuidado para evitar respingos!