DNase I
DNase I (Desoxirribonuclease I) é uma endodesoxirribonuclease que pode digerir DNA de fita simples ou dupla.Ele reconhece e cliva ligações fosfodiéster para produzir monodesoxinucleotídeos ou oligodesoxinucleotídeos de fita simples ou dupla com grupos fosfato no terminal 5' e hidroxila no terminal 3'.A atividade da DNase I depende do Ca2+ e pode ser ativada por íons metálicos divalentes como Mn2+ e Zn2+.5mM de Ca2+ protege a enzima da hidrólise.Na presença de Mg2+, a enzima poderia reconhecer e clivar aleatoriamente qualquer local em qualquer fita de DNA.Na presença de Mn2+, as fitas duplas de DNA podem ser simultaneamente reconhecidas e clivadas quase no mesmo local para formar fragmentos de DNA de extremidade plana ou fragmentos de DNA de extremidade pegajosa com 1-2 nucleotídeos salientes.
Propriedade do produto
A DNase I do Pâncreas Bovino foi expressa em sistema de expressão de levedura e purificada.
Ccomponentes
| Componente | Volume | |||
| 0,1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, livre de RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10mL |
| 10×tampão DNase I | 1mL | 1mL | 5× 1mL | 5× 10mL |
Transporte e Armazenamento
1. Estabilidade de armazenamento: – 15℃~-25℃ para armazenamento;
2.Estabilidade de transporte: Transporte sob bolsas de gelo;
3. Fornecido em: Tris-HCl 10 mM, CaCl 2 mM2, 50% de glicerol, pH 7,6 a 25°C.
Definição de Unidade
Uma unidade é definida como a quantidade de enzima que degradará completamente 1 µg de ADN de pBR322 em 10 minutos a 37°C.
Controle de qualidade
RNase:5U de DNase I com 1,6 μg de RNA MS2 por 4 horas a 37 ℃ não produz degradação conforme determinado por eletroforese em gel de agarose.
Bacteriana Endotoxina:Teste LAL, de acordo com a Farmacopeia Chinesa IV edição 2020, método de teste de limite de gel, regra geral (1143).O conteúdo de endotoxinas bacterianas deve ser ≤10 EU/mg.
Instruções de uso
1.Prepare a solução de reação no tubo livre de RNase de acordo com as proporções listadas abaixo:
| Componente | Volume |
| ARN | X μg |
| 10 × Tampão DNase I | 1 μL |
| DNase I, livre de RNase (5U/μL) | 1 U por μg de RNA |
| ddH2O | Até 10 μL |
2,37 ℃ por 15 minutos;
3.Adicione o tampão de terminação para interromper a reação e aqueça a 65°C por 10 minutos para inativar a DNase I. A amostra pode ser usada diretamente para o próximo experimento de transcrição.
Notas
1.Use 1U DNase I por μg de RNA ou 1U DNase I para menos de 1μg de RNA.
2.EDTA deve ser adicionado a uma concentração final de 5 mM para proteger o RNA de ser degradado durante a inativação da enzima.
