Transcriptase reversa M-MLV
A transcriptase reversa RevScript é obtida por tecnologia de engenharia genética.Possui maior capacidade de síntese de cDNA, estabilidade térmica e limite de temperatura de reação (até 60°C).O produto de cDNA sintetizado tem até 10 kb.Aumenta a afinidade dos modelos e é adequado para transcrição reversa de modelos de RNA com estrutura secundária complexa ou genes de baixa cópia.
Componentes
| Componente | HC2003B-01 (10.000U) | HC2003B-02 (5*10.000U) | HC2003B-03 (200.000U) |
| Transcriptase reversa RevScript (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1ml |
| 5 × Buffer RevScript | 250 μL | 1,25ml | 5ml |
Condição de armazenamento
Este produto deve ser armazenado a -25°C~-15°C por 2 anos.
Definição de Unidade
Uma unidade incorpora 1 nmol de dTTP em material insolúvel em ácido em 10 minutos a 37°C usando Oligo(dT) como primers.
Configuração de reação
1.Desnaturação do modelo de RNA (Esta etapa é opcional, a desnaturação do modelo de RNA ajuda a abrir as estruturas secundárias, o que melhorará o rendimento da primeira fita de cDNA).
| Componentes | Volume (μL) |
| RNase ddH livre2O | Para 13 |
| Oligo(dT)18 (50 μmol/L) ou Primer Aleatório (50 μmol/L) Ou Primers Específicos de Gene (2 μmol/L) | 1 |
| ou 1 | |
| ou 1 | |
| Modelo de RNA | Xa |
Notas:
1) a: RNA total: 1-5 ug ou mRNA: 1-500 ng
2) Incubar a 65°C durante 5 minutos e depois transferir imediatamente para gelo para arrefecer durante 2 minutos.Breve centrifugação para coletar o líquido de reação, adicione a solução de reação de transcrição reversa conforme mostrado na tabela a seguir.Pipete suavemente para misturar.
1.Preparação da mistura de reação (volume de 20 μL)
| Componentes | Volume (μL) |
| Mistura da etapa anterior | 13 |
| 5×amortecedor | 4 |
| Mistura dNTP (10nmol/L) | 1 |
| Transcriptase reversa (200 U/μL) | 1 |
| Inibidor de RNase (40 U/μL) | 1 |
1.Execute a reação nas seguintes condições:
| Temperatura (°C) | Tempo |
| 25ºCa | 5 minutos |
| 42ºCb | 15-30 minutos |
| 85°Cc | 5 minutos |
Notas:
1) uma.A incubação a 25°C durante 5 minutos é necessária apenas para utilizar os hexâmeros aleatórios.Pule esta etapa ao usar Oligo (dT)18ou Primer Específico de Gene.
2) b.A temperatura de transcrição reversa recomendada é de 42°C. Para modelos com estruturas secundárias complicadas ou alto conteúdo de GC, recomenda-se aumentar a temperatura de reação para 50-55°C.
3) c.Aquecimento a 85°C durante 5 minutos para inativar a transcriptase reversa.
4) O produto pode ser utilizado diretamente em reações PCR ou qPCR, ou armazenado a -20°C para armazenamento de curto prazo.Recomenda-se aliguar os produtos e armazenar a -80°C para armazenamento a longo prazo.Evite congelamentos e descongelamentos frequentes.
5) O produto é adequado para RT-qPCR de uma etapa, recomenda-se adicionar 10-20 U de transcriptase reversa para cada sistema de reação de 25μL ou aumentar gradualmente a quantidade de transcriptase reversa de acordo com a situação real.
Notas
1.Por favor, mantenha a área experimental limpa;Luvas e máscaras limpas devem ser usadas durante a operação.Todos os consumíveis utilizados no experimento devem ser livres de RNase para evitar contaminação por RNase.
2.Todos os procedimentos devem ser realizados em gelo para evitar a degradação do RNA.
3. Amostras de RNA de alta qualidade são recomendadas para garantir alta eficiência de transcrição reversa.
4.Este produto é apenas para uso em pesquisa.
5. Por favor, opere com jalecos e luvas descartáveis, para sua segurança.
