Kit de genotipagem de camundongos

Número do gato: HCR2021A

Este produto é um kit desenvolvido para a identificação rápida de genótipos de camundongos, incluindo extração bruta de DNA e sistema de amplificação por PCR.O produto pode ser usado para amplificação por PCR diretamente da cauda, ​​orelha, dedo do pé e outros tecidos de camundongos após simples clivagem por tampão de lise e proteinase k.Sem digestão durante a noite, extração com fenol-clorofórmio ou purificação em coluna, o que é simples e reduz o tempo gasto nos experimentos.O produto é adequado para amplificação de fragmentos alvo de até 2kb e reações de PCR multiplex com até 3 pares de primers.O 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix contém DNA polimerase geneticamente modificada, Mg²⁺, dNTPs e um sistema tampão otimizado para fornecer alta eficiência de amplificação e tolerância ao inibidor, de modo que as reações de PCR possam ser realizadas adicionando molde e primers e reidratando o produto a 1×.O produto de PCR amplificado com este produto possui uma base “A” proeminente na extremidade 3' e pode ser usado diretamente para clonagem TA após purificação.

Componentes

Condições de armazenamento

Os produtos devem ser armazenados a -25~-15°C por 2 anos.Após o descongelamento, o Lysis Buffer pode ser armazenado a 2 ~ 8 ℃ para uso múltiplo de curto prazo e misturar bem durante o uso.

Aplicativo

Este produto é adequado para análise de nocaute em camundongos, detecção de transgênicos, genotipagem e assim por diante.

Características

1.Operação simples: não há necessidade de extrair DNA genômico;

2.Ampla aplicação: adequado para amplificação direta de vários tecidos de camundongos.

Instruções

1.Liberação de DNA genômico

1) Preparação do lisado

O lisado tecidual é preparado de acordo com o número de amostras de camundongos a serem lisadas (o lisado tecidual deve ser preparado no local de acordo com a dosagem e bem misturado para uso), e a proporção de reagentes necessários para uma única amostra é a seguinte:

2) Preparação e Lise de Amostras

Uso recomendado de tecido

Pegue uma quantidade apropriada de amostras de tecido de camundongo em tubos de centrífuga limpos, adicione 200 μL de lisado de tecido fresco a cada tubo de centrífuga, vórtice e agite, depois incube a 55°C por 30 minutos e depois aqueça a 98°C por 3 minutos.

3) Centrifugação

Agite bem o lisado e centrifugue a 12.000 rpm durante 5 minutos.O sobrenadante pode ser usado como modelo para amplificação por PCR.Se o modelo for necessário para armazenamento, transfira o sobrenadante para outro tubo de centrífuga estéril e armazene a -20°C por 2 semanas.

2.Amplificação por PCR

Remova o 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix de -20°C e descongele em gelo, misture de cabeça para baixo e prepare o sistema de reação PCR de acordo com a tabela a seguir (operar em gelo):

Observação:

a) A quantidade adicionada não deve exceder 1/10 do sistema e, se for adicionado muito, a amplificação por PCR pode ser inibida.

Condições de PCR recomendadas

Observação:

a) Temperatura de recozimento: Com referência ao valor Tm do primer, recomenda-se definir a temperatura de recozimento para o menor valor Tm do primer +3~5℃.

Problemas e soluções comuns

1.Nenhuma faixa direcionada

1) Produto de lise excessivo.Escolha a quantidade de modelo mais adequada, geralmente não superior a 1/10 do sistema;

2) Tamanho da amostra muito grande.Diluir o lisado 10 vezes e depois amplificar ou reduzir o tamanho da amostra e re-lise;

3) As amostras de tecido não são frescas.Recomenda-se a utilização de amostras de tecido fresco;

4) Má qualidade do primer.Use DNA genômico para amplificação para verificar a qualidade do primer e otimizar o design do primer.

2.Amplificação não específica

1) A temperatura de recozimento está muito baixa e o número do ciclo está muito alto.Aumente a temperatura de recozimento e reduza o número de ciclos;

2) A concentração do modelo é muito alta.Reduza a quantidade de modelo ou dilua o modelo 10 vezes após a amplificação;

3) Fraca especificidade do primer.Otimize o design do primer.

Notas

1.Para evitar contaminação cruzada entre amostras, devem ser preparadas múltiplas ferramentas de amostragem, e a superfície das ferramentas pode ser limpa com solução de hipoclorito de sódio a 2% ou limpador de ácido nucleico após cada amostragem, se for necessário o uso repetido.

2.Recomenda-se a utilização de tecidos frescos de rato, e o volume de amostragem não deve ser muito grande para evitar afetar os resultados da amplificação.

3.O tampão de lise deve evitar congelamento-descongelamento frequente e pode ser armazenado a 2 ~ 8 ℃ para uso múltiplo de curto prazo.Se armazenado em baixa temperatura, pode ocorrer precipitação e deve ser totalmente dissolvido antes do uso.

4.PCR Mix deve evitar congelamento-descongelamento frequente e pode ser armazenado a 4 ℃ para uso repetido por curto prazo.

5.Este produto destina-se apenas a pesquisas científicas experimentais e não deve ser utilizado em diagnóstico ou tratamento clínico.