Polimerase de DNA Robustat Taq

A Robustart Taq DNA Polymerase é uma DNA polimerase de início a quente.Este produto pode não apenas inibir melhor a reação inespecífica causada pelo recozimento inespecífico de primers ou agregação de primers no processo de preparação e amplificação do sistema PCR.Portanto, possui excelente especificidade e é mais eficaz para a amplificação de modelos de baixa concentração, sendo adequado para reação de amplificação por PCR multiplexada.Além disso, este produto tem aplicabilidade muito boa e resultados de amplificação estáveis ​​podem ser obtidos em diferentes tipos de reações de PCR.

Componentes

1.5 U/μL Robustart Taq DNA polimerase

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ livre) (opcional)

3.25 mM de MgCl2₂(opcional)

* 10 × PCR Buffer II (livre de Mg²+) não contém dNTP e Mg²+, adicione dNTPs e MgCl₂ao preparar o sistema de reação.

Aplicativos recomendados

1.Amplificação rápida.

2.Amplificação múltipla.

3.Amplificação direta de sangue, esfregaços e outras amostras.

4.Detecção de doenças respiratórias.

Condição de armazenamento

-20°C para armazenamento de longo prazo, deve ser bem misturado antes do uso, evitar congelamento-descongelamento frequente.

*Se ocorrer precipitação após refrigeração, é normal;recomenda-se equilibrar à temperatura ambiente antes de misturar e usar.

Definição de Unidade

Uma unidade ativa (U) é definida como a quantidade de enzima que incorpora 10 nmol de desoxirribonucleotídeo em material insolúvel em ácido a 74°C por 30 minutos usando DNA de esperma de salmão ativado como modelo/primer.

Controle de qualidade

1.Pureza eletroforética de SDS-PAGE superior a 98%.

2.Sensibilidade de amplificação, controle lote a lote, estabilidade.

3.Sem atividade de nuclease exógena, sem endonuclease exógena ou contaminação por exonuclease

Instruções

Configuração de reação

Notas:

1) uma.O buffer não contém dNTP e Mg²+, adicione dNTPs e MgCl₂ao preparar o sistema de reação.

2) b.Se usado para qPCR/qRT-PCR, sondas fluorescentes devem ser adicionadas ao sistema de reação.Normalmente, uma concentração final de primer de 0,2 μM dará bons resultados;se o desempenho da reação for ruim, a concentração do primer pode ser ajustada na faixa de 0,2-1 μM.A concentração da sonda é geralmente otimizada na faixa de 0,1-0,3 μM.Experimentos de gradiente de concentração podem ser realizados para encontrar a melhor combinação de primer e sonda.

Protocolo de ciclagem térmica

Notas

1.A taxa de amplificação da DNA polimerase rápida não deve ser inferior a 1 kb/10 s.A taxa de aumento e queda de temperatura, o modo de controle de temperatura e a eficiência de condução de calor de diferentes instrumentos de PCR variam muito, por isso é recomendado otimizar as condições de reação ideais para o instrumento de PCR rápido específico.

2.O sistema é altamente adaptável, com maior especificidade e sensibilidade.

3.Adequado para uso como reagentes de detecção de PCR de alta sensibilidade e pode ser usado em reações de amplificação por PCR multiplex.

4.atividade de polimerase 5'→3', atividade de exonuclease 5'→3';nenhuma atividade de exonuclease 3'→5';nenhuma função de revisão.

5.Adequado para testes qualitativos e quantitativos de PCR e RT-PCR.

6.A extremidade 3' do produto de PCR é A, que pode ser clonada diretamente em um vetor T.

7.O método de três etapas é recomendado para primers com baixas temperaturas de recozimento ou para amplificação de fragmentos maiores que 200 pb.