UNG sensível à temperatura
O UNG Sensível à Temperatura (TS-UNG) é obtido por expressão recombinante em E. coli.A enzima catalisa a liberação de uracila livre do DNA de fita simples e dupla contendo uracila e é inativa contra o RNA.Comparada com a enzima UNG convencional de origem genética de E. coli, a enzima TS-UNG tem maior atividade em baixas temperaturas (20°C ~ 37°C) e é sensível à temperatura e facilmente inativada (50°C), evitando a degradação da amplificação contendo dUTP produtos à temperatura ambiente pela atividade residual que pode permanecer após a inativação da enzima UNG convencional.Portanto, a enzima TS-UNG não é apenas adequada para reação de prevenção de contaminação por PCR, mas também combina bem com o programa de amplificação de RT-PCR e pode ser usada na reação de prevenção de contaminação por RT-PCR.
Aplicação recomendada
Amplificação de Prevenção de Contaminação
Condição de armazenamento
-20°C para armazenamento de longo prazo, deve ser bem misturado antes do uso, evitar congelamento-descongelamento frequente.
Buffer de armazenamento
Tris-HCl 20 mM (pH 7,5), NaCl 100 mM, EDTA 0,1 mM, DTT 1 mM, Estabilizador, 50% de glicerol.
Definição de Unidade
A quantidade de enzima necessária para degradar 1 µg de ADN de cadeia simples contendo bases dU em 1 hora a 37°C é de 1 unidade de actividade (U).
Controle de qualidade
1.Pureza eletroforética SDS-PAGE superior a 98%
2.Atividade de degradação, controle lote a lote, estabilidade
3.Nenhuma atividade de nuclease exógena, nenhuma endonuclease exógena ou contaminação por exonuclease.
Instruções
| Componentes | Volume (μL) | Concentração final |
| 10 × Tampão PCR (sem dNTP, Mg²+livre) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (substituir dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM de MgCl22 | 2-8 μL | 1-4mm |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5U (0,1-0,5U) |
| 25 × Mistura de Primera | 2 | 1× |
| Modelo | - | <1μg/reação |
| ddH₂O | Até 50 | - |
Nota: a: Se usada para qPCR/qRT-PCR, a sonda fluorescente deve ser adicionada ao sistema de reação.Normalmente, uma concentração final de primer de 0,2 μM pode dar bons resultados;quando o desempenho da reação é ruim, a concentração do primer pode ser ajustada na faixa de 0,2-1 μM.Normalmente, a concentração da sonda é otimizada na faixa de 0,1-0,3 μM.Experimentos de gradiente de concentração podem ser realizados para encontrar a melhor combinação de primer e sonda.
Notas
1.A temperatura de reação ideal da enzima TS-UNG é relativamente baixa e pode ser otimizada na faixa de 20 ℃ ~ 37 ℃, a dosagem da enzima e o tempo de reação podem ser otimizados na faixa de 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 minutos;e a enzima pode ser inativada no processo de transcrição reversa.
2.É adequado para PCR e RT-PCR para evitar contaminação.
3.Evite congelamentos e descongelamentos frequentes e não exponha a grandes flutuações de temperatura.
4.Diferentes genes a serem amplificados possuem diferentes eficiências de utilização do dUTP e sensibilidade à enzima UNG, portanto, se o uso do sistema UNG levar a uma diminuição na sensibilidade de detecção, o sistema de reação deverá ser ajustado e otimizado, caso necessite de suporte técnico, entre em contato nossa empresa.
