Pré-mistura de sonda qPCR multiplex
Número do gato: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) é uma pré-solução para amplificação quantitativa por PCR 2 × em tempo real caracterizada por alta sensibilidade e especificidade, que é de cor azul e tem o efeito de adição de amostra.Este produto é um reagente pré-misturado 2× Mix que permite até quatro reações de PCR quantitativas fluorescentes em um único poço de reação.Este produto contém o método de anticorpo geneticamente modificado para iniciar a enzima Taq a quente, melhorando significativamente a sensibilidade e especificidade da amplificação.Ao mesmo tempo, este produto otimizou profundamente o tampão multirreação, o que pode melhorar a eficiência de amplificação da reação e promover a amplificação eficaz de modelos de baixa concentração.Este produto pode ser usado para genotipagem e análise quantitativa multiplex.
Especificação
| Início quente | Início a quente integrado |
| Método de detecção | Detecção de sonda iniciadora |
| Método PCR | qPCR |
| Polimerase | Taq DNA polimerase |
| Tipo de amostra | ADN |
Condições de armazenamento
O produto é enviado com gelo seco e pode ser armazenado a -25 ~ -15 ℃ por 2 anos.
Instruções
1. ReaçãoSistema
| Componentes | Volume (μL) | Concentração Final |
| 2× Mistura mestre qPCR multiplex TaqMan | 12,5 | 1× |
| Mistura de primer (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Mistura de sonda (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Corante de referência Rox | 0,5 | 1× |
| Modelo de DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | até 25 | - |
Notas:Misture bem antes de usar para evitar bolhas excessivas devido à agitação vigorosa.
a.Concentração de primer: Primer Mix contém vários pares de primers, geralmente cada primer com uma concentração final de 0,2 μmol/L e também pode ser ajustado entre 0,1 e 0,5 μmol/L conforme apropriado.
b.Concentração da sonda: A mistura de sondas contém múltiplas sondas com diferentes sinais de fluorescência, e a concentração de cada sonda pode ser ajustada entre 50 e 250 nmol/L de acordo com a situação específica.
1.Referência de corante Rox:É usado em instrumentos de amplificação de PCR em tempo real, como Applied Biosystems, para corrigir o erro do sinal de fluorescência gerado entre poços;este produto não contém referência de corante Rox.Cas#10200 é recomendado se necessário.
2.Diluição do modelo: o qPCR é altamente sensível e é recomendado diluir o modelo para uso.Se o modelo for uma solução stock de cDNA, o volume do modelo não deverá exceder 1/10 do volume total.
3.Sistema de reação: 25μL, 30μL ou 50 μL são recomendados para garantir a eficácia e repetibilidade da amplificação do gene alvo.
4.Preparação do sistema: Prepare na bancada super limpa e utilize as pontas e tubos de reação sem resíduo de nuclease;recomenda-se utilizar pontas com cartuchos filtrantes.Evite contaminação cruzada e contaminação por aerossol.
2.Programa de reação
| Etapa do ciclo | Temperatura. | Tempo | Ciclos |
| Desnaturação inicial | 95 ℃ | 5 minutos | 1 |
| Desnaturação | 95 ℃ | 15 segundos | 45 |
| Recozimento/Extensão | 60 ℃ | 30 segundos |
Notas:
1.Recozimento/Extensão: A temperatura e o tempo podem ser ajustados adequadamente de acordo com o valor Tm do primer projetado.
2.Aquisição do sinal de fluorescência: O tempo de aquisição do sinal de fluorescência necessário para diferentes instrumentos de detecção qPCR é diferente, defina de acordo com o limite de tempo mínimo.A hora de vários instrumentos comuns é definida da seguinte forma:
20 seg: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 seg: Biossistemas Aplicados 7300
32 seg: Biossistemas Aplicados 7500
Notas
Por favor, use o EPI necessário, como jaleco e luvas, para garantir sua saúde e segurança!
