Multiplex One Step RT-qPCR Pré-mistura-UNG
Número do gato: HCB5145A
O kit de sonda Multiplex One Step RT-qPCR (UDG Plus) é um kit de PCR quantitativo multiplex baseado em RNA como modelo.No decorrer do experimento, foram realizadas transcrição reversa e PCR quantitativa no mesmo tubo, o que simplificou a operação experimental e reduziu o risco de contaminação.Neste kit, a primeira cadeia de cDNA foi sintetizada eficientemente pela Transcriptase Reversa resistente ao calor e amplificada quantitativamente pela HotStart Tag DNA Polymerase.O kit contém principalmente tampão MP otimizado, mistura de enzimas, etc. A solução tampão já contém Mg2+e dNTP.Além disso, são adicionados os fatores que podem efetivamente inibir a amplificação de PCR não específica e melhorar a eficiência de amplificação de múltiplas reações de qPCR, o que pode garantir a eficiência de amplificação e realizar até múltiplas reações de amplificação.O sistema dUTP/UDG foi adicionado para prevenir eficazmente o risco de contaminação por aerossol.
Componentes
1. Tampão
2. Mistura de enzimas
Especificação
| Início quente | Início a quente integrado |
| Método de detecção | Detecção de sonda iniciadora |
| Método PCR | RT-qPCR de uma etapa |
| Polimerase | Taq DNA polimerase |
| Tipo de amostra | ADN |
Condições de armazenamento
O produto é enviado com gelo seco e pode ser armazenado a -25 ~ -15 ℃ por 1 ano.Deve-se evitar freqüentescongelar-descongelar.Recomenda-se salvar separadamente.
Instruções
1.Reação Sistema
| Componentes | Volume (μL) | Concentração Final |
| 2 × Tampão MP | 12,5 | 1× |
| Mistura Enzimática | 1 | - |
| Mistura de primer/sonda (2,5 μM) | 3 | 0,3μM |
| Modelo de RNA | 1-10 | - |
| RNase H2O livre | para 25 | - |
Notas:
Certifique-se de misturar bem antes de usar, evite bolhas excessivas causadas por vibrações violentas.
a.Concentração de primer: Mistura de primer incluindo primer multiplex, dependendo da situação, a concentração ideal de primer pode estar entre 0,1 e 1,0μM.
b.Concentração da sonda: Mistura de sondas incluindo grupo fluorescente de diferença de rotulagem de sonda multiplex, dependendo da situação, a concentração ideal da sonda pode estar entre 0,05 e 0,5 μM.
c.Diluição do modelo: qPCR é altamente sensível e é recomendado diluir o modelo.O valor Ct de controle é adequado entre 20 e 35.
d.Preparação do sistema: Prepare na mesa de trabalho ultra limpa, na pipeta e no tubo de reação sem resíduo de nuclease;recomenda-se usar a cabeça da pistola com elemento filtrante.Evite contaminação cruzada e contaminação por aerossol.
2. Ciclismo OtimizadoProtocolo
| Ciclo etapa | Temperatura. | Tempo | Ciclos |
| Transcrição reversa | 50°Ca | 20 minutos | 1 |
| Desnaturação inicial | 95°C | 5 minutos | 1 |
| Reação de amplificação | 95°C | 15 segundos |
40-45 |
| 60°C b | 30 segundos c |
Notas:
a.Transcrição reversa:A temperatura pode selecionar 42°C ou 50°C.
b.Reação de amplificação: A temperatura é ajustada de acordo com o valor de Tm dos primers projetados.
c.Aquisição de sinal de fluorescência: Defina o procedimento experimental de acordo com os requisitos do manual do instrumento.
Notas
Use o EPI necessário, como jaleco e luvas, para garantir sua saúde e segurança.
