Inibidor de Rnase (sem glicerol)
O inibidor de RNase murina é um inibidor de RNase murina recombinante expresso e purificado a partir de E.coli.Liga-se à RNase A, B ou C numa proporção de 1:1 através de ligação não covalente, inibindo assim a actividade das três enzimas e protegendo o ARN da degradação.No entanto, não é eficaz contra RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H ou RNase de Aspergillus.O inibidor murino de RNase foi testado por RT-PCR, RT-qPCR e mRNA IVT e foi compatível com várias transcriptases reversas comerciais, DNA polimerases e RNA polimerases.
Comparado aos inibidores de RNase humanos, o inibidor de RNase murino não contém duas cisteínas que são altamente sensíveis à oxidação que causa a inativação do inibidor.Isso o torna estável em baixas concentrações de DTT (menos de 1 mM).Esta característica o torna adequado para uso em reações onde altas concentrações de DTT são adversas à reação (por exemplo, RT-PCR em tempo real).
Aaplicação
Este produto pode ser amplamente utilizado em qualquer experimento onde a interferência da RNase seja possível para evitar a degradação do RNA, como:
1.Síntese de cDNA da primeira cadeia, RT-PCR, RT-qPCR, etc.;
2.Proteger o RNA da degradação na transcrição/tradução in vitro (por exemplo, replicação viral in vitro);
3.Inibição da atividade da RNase durante o isolamento e purificação do RNA.
Condições de armazenamento
Armazenar entre -25~-15℃;
Ciclos de congelamento-descongelamento ≤ 5 vezes;
Válido por 1 ano.
Definição de unidade
Uma unidade é definida como a quantidade de inibidor de RNase necessária para inibir a atividade de 5 ng de RNase A em 50%.
Peso molecular
O inibidor de RNase (sem glicerol) é uma proteína de 50 kDa.
Controle de qualidade
Exonuclease Atividade:
A incubação de 40 U de enzima com 1 μg de ADN digerido com λ-Hind III durante 16 horas a 37°C não resultou em degradação detectável do ADN, conforme determinado por electroforese em gel.
Atividade de endonuclease:
A incubação de 40 U de enzima com 1 μg de DNA de λ durante 16 horas a 37°C não resultou em degradação detectável do DNA, conforme determinado por eletroforese em gel.
Roubando Atividade:
A incubação de 40 U de enzima com 1 μg de pBR322 durante 16 horas a 37°C não resultou em degradação detectável do DNA, conforme determinado por eletroforese em gel.
RNase Atividade:
A incubação de 40 U de enzima com 1,6 μg de RNA MS2 por 4 horas a 37°C não resultou em degradação detectável do RNA, conforme determinado por eletroforese em gel.
E.coli DNA:
40 U de enzima são detectados por TaqMan qPCR.O DNA de E.coli é ≤ 0,1pg/40U.
Nnotas
1.Não agite ou mexa violentamente para evitar a inativação enzimática.
2. O inibidor de RNase é ativo em temperaturas que variam de 25 ℃ a 55 ℃ e é inativado em ≥65 ℃.
3.A atividade de RNase H, RNase 1 e RNase T1 não é inibida.
4.A faixa de pH para inibição da atividade da RNase é ampla (ativa em pH 5-9), exibindo atividade máxima em pH 7-8.
