Reagente de Liberação de Amostra
O reagente de liberação de amostra destina-se a cenários de diagnóstico POCT molecular.Para os dois sistemas de amplificação direta LAMP e PCR de amplificação direta, não há necessidade de extração de ácido nucleico.O lisado bruto da amostra pode ser amplificado diretamente, o gene alvo pode ser detectado com precisão, o tempo de detecção da amostra pode ser ainda mais reduzido, o que corresponde perfeitamente aos requisitos de aplicação do POCT molecular.É adequado para esfregaços nasais, esfregaços de garganta e outros tipos de amostras.As amostras processadas podem ser usadas diretamente para PCR quantitativo de fluorescência em tempo real ou detecção de LAMP, e os mesmos resultados dos métodos de extração convencionais podem ser alcançados sem operações complicadas de extração de ácido nucleico.
Condições de armazenamento
Transportar e armazenar em temperatura ambiente.
Controle de qualidade
Detecção funcional – qPCR quantitativo: O sistema de reagente de liberação de amostra de 800μl foi amplificado
com 1000 cópias do Novel Pseudovirus, uma amostra de swab nasal, resultando em curvas de amplificação semelhantes eValores de ΔCt dentro de ± 0,5 Ct.
Procedimento Experimentalresolução
1. Pegue 800 μl de reagente de liberação de amostra e espalhe a solução de lise em um tubo de amostragem de 1,5 mL.
2. Pegue o esfregaço nasal ou o esfregaço da garganta com o esfregaço; Procedimento de amostragem do esfregaço nasal: pegue o esfregaço estéril e coloque-o nas narinas, avance lentamente até cerca de 1,5 cm de profundidade, gire suavemente 4 vezes contra a mucosa nasal por mais de 15 segundos , em seguida, repita a mesma operação na outra cavidade nasal com o mesmo cotonete. Procedimento de amostragem de cotonete de garganta: pegue o cotonete estéril e limpe suavemente e rapidamente as tonsilas faríngeas e a parede posterior da faringe 3 vezes.
3.Coloque o swab imediatamente no tubo de amostragem.A cabeça do swab deve ser girada e misturada na solução de armazenamento por pelo menos 30 segundos para garantir que a amostra seja totalmente eluída no tubo de amostragem.
4. Incubação em temperatura ambiente (20 ~ 25 ℃) por 1 minuto, a preparação do tampão de lise é concluída.
5. Tanto o sistema RT-PCR quanto o RT-LAMP de 25 μl foram compatíveis com a adição de 10 μl de modelo para experimentos de detecção.
Notas
1. A quantidade mínima de lisado direto da amostra correspondente a um único cotonete pode ser ajustada para 400μl, que pode ser ajustada de acordo com as necessidades do teste.
2. Uma vez processada a amostra pelo reagente de liberação da amostra, recomenda-se realizar a próxima fase do teste o mais rápido possível, o intervalo de espera é preferencialmente inferior a 1 hora.
3. O pH do lisado da amostra é ácido e o sistema de detecção precisa ter um determinado tampão.É adequado para a maioria das detecções de fluorescência PCR, RT-PCR e LAMP com tampão de pH, mas não é adequado para detecção colorimétrica LAMP sem tampão.
