Pré-mistura Multiplex One Step RT-qPCR
Descrição
Número do gato: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix é um kit de PCR quantitativo multiplex baseado em RNA como modelo.No experimento, a transcrição reversa e a PCR quantitativa são realizadas no mesmo tubo de reação, simplificando a operação experimental e reduzindo o risco de contaminação.O design exclusivo do tampão e da mistura de enzimas pode ser usado em um sistema liofilizado de uma etapa.O kit utiliza transcriptase reversa resistente ao calor para síntese eficiente da primeira fita de cDNA usando hotstart Taq DNA polimerase para amplificação quantitativa.Ele contém tampão de reação otimizado, mistura de enzimas, etc., e foram adicionados fatores que efetivamente inibem a amplificação de PCR não específica e aumentam a eficiência de amplificação de múltiplas reações qPCR, permitindo a amplificação quantitativa de fluorescência múltipla, garantindo ao mesmo tempo a eficiência de amplificação dos primers.
Componentes
Nome |
1. Lyo-tampão |
2. Mistura de lioenzima |
3. Protetor Lyo |
Condições de transporteíon
R: Lyo-buffer e protetor: -25 ~ -15 ℃, a vida útil é de 1 ano.
B: Mistura de lioenzima, 2-8 ℃, prazo de validade é de 6 meses.
Instrução para operação
1. Sistema de reação (tome 25μL como exemplo)
Componentes | Volume (μL) | Concentração Final |
Lyo-tampão | 6 | 1* |
Mistura de lioenzimas | 1 | - |
Lio-Protetor | 8 | - |
Mistura de Primers (10μM) | 1 | 0,1-1uM |
Mistura de Sondas (10μM) | 0,5 | 0,05-0,5uM |
Modelo de RNA | 5 | - |
DEPC H2O | Até 25 | - |
2. Protocolo de ciclismo otimizado
1) Protocolo Padrão de Ciclismo
Estágio de reação | Temperatura | Tempo | Ciclo | |
1 | Transcrição reversa | 50°Ca | 10 minutos | 1 |
2 | Desnaturação inicial | 95°C | 5 minutos | 1 |
3 | Reação de amplificação | 95°C | 15 segundos | 45 ciclos |
60°Cb | 30 segundosc |
2) Protocolo de Ciclismo Rápido
| Estágio de reação | Temperatura | Tempo | Ciclo |
1 | Transcrição reversa | 50°Ca | 2 minutos | 1 |
2 | Desnaturação inicial | 95°C | 2 segundos | 1 |
3 | Reação de amplificação | 95°C | 1 segundo |
45 ciclos |
60°Cb | 13 segundosc |
Observação:
a) Reverter transcrição: A temperatura pode selecionar 42°C ou 50°C por 10-15 minutos.
b) Reação de amplificação: A temperatura é ajustada de acordo com o valor Tm dos primers projetados.
c)Fluorescência sinal aquisição: Por favor, defina o procedimento experimental de acordo com os requisitos domanual do instrumento.
Informações/Especificações Técnicas
Início quente | Início a quente integrado |
Método de detecção | Detecção de sonda iniciadora |
Método PCR | RT-qPCR de uma etapa |
Tipo de amostra | ARN |
Notas
1. Este produto é apenas para uso em pesquisa.
2. Use o EPI necessário, como jaleco e luvas, para garantir sua saúde e segurança!