Rnase A
A ribonuclease A (RNaseA) é um polipeptídeo de fita simples contendo 4 ligações dissulfeto com peso molecular de cerca de 13,7 kDa.A RNase A é uma endorribonuclease que degrada especificamente o RNA de fita simples nos resíduos C e U.Especificamente, a clivagem reconhece a ligação fosfodiéster formada pela 5'-ribose de um nucleotídeo e o grupo fosfato na 3'-ribose do nucleotídeo pirimidina adjacente, de modo que os fosfatos 2, 3'-cíclicos são hidrolisados no correspondente 3 'fosfatos de nucleosídeo (por exemplo, pG-pG-pC-pA-pG é clivado pela RNase A para gerar pG-pG-pCp e A-PG).A RNase A é a mais ativa na clivagem do RNA de fita simples.A concentração de trabalho recomendada é de 1-100μG/mL, compatível com vários sistemas de reação.Baixa concentração de sal (0-100 mM NaCl) pode ser usada para cortar RNA de fita simples, RNA de fita dupla e cadeias de RNA formadas por hibridização de RNA-DNA.No entanto, em alta concentração de sal (≥0,3 M), a RNase A cliva especificamente apenas o RNA de fita simples.
A RNase A é mais comumente usada para remover RNA durante a preparação de DNA plasmídico ou DNA genômico. Se a DNase está ativa ou não durante o processo de preparação pode facilmente afetar a reação.O método tradicional de fervura em banho-maria pode ser usado para inativar a atividade da DNase.Este produto não contém DNase e protease e não requer tratamento térmico antes do uso.Além disso, este produto também pode ser utilizado em experimentos de biologia molecular, como análise de proteção de RNase e análise de sequência de RNA.
Condições de armazenamento
O produto pode ser armazenado a -25~-15°C, válido por 2 anos.
Instruções
Este é um dos métodos comuns para preparar a solução de armazenamento de RNase A.Também pode ser preparado poroutros métodos de acordo com os métodos tradicionais em laboratório ou literatura de referência (comodissolvendo diretamente em solução Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 ou Tris-NaCl)
1. Use acetato de sódio 10 mM (pH 5,2) para preparar 10 mg/mL de solução de armazenamento RNase A
2. Aquecimento a 100 ℃ por 15 min
3. Resfrie à temperatura ambiente, adicione 1/10 do volume de Tris-HCl 1 M (pH 7,4), ajuste seu pH para 7,4 (paraexemplo, adicione 500 ml de solução de armazenamento de RNase 10g/ml 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Subembalado a -20 ℃ para armazenamento congelado, que pode ser estável por até 2 anos.
[Notas]: Ao ferver a solução RNaseA em condições neutras, a precipitação de RNase se formará;Ferva em pH menor e se houver precipitação pode-se observar, o que pode ser causado pela presença de impurezas proteicas.Se forem encontrados sedimentos após a fervura, as impurezas podem ser removidas por centrifugação de alta velocidade (13.000 rpm) e depois subembaladas para armazenamento congelado.
Informação do produto
| Sinônimos | Ribonuclease I;Ribonuclease pancreática;Ribonuclease 3'-pirimidnooligonucleotidohidrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| Nº CAS | 9001-99-4 |
| Aparência | Pó liofilizado branco |
| Peso molecular | ~ 13,7kDa (sequência de aminoácidos) |
| Valor do PH | 7,6 (faixa de atividade 6-10) |
| Temperatura adequada | 60°C (faixa de atividade 15-70°C) |
| Agente ativador | Na2+.K+ |
| Inibidor | Inibidor de Rnase |
| Método de inativação | Não é possível inativar por aquecimento, sugere-se o uso de coluna centrífuga |
| Origem | Bovino |
| Solubilidade | Solúvel em água (10mg/ml) |
| Perda no seco | ≤5,0% |
| Atividade enzimática | ≥60 unidades Kunitz/mg |
| Ponto de isolação eletrica | 9.6 |
Notas
Para sua segurança e saúde, use jalecos e luvas descartáveis para operação.
