Classe Ultra Nuclease GMP
Número do gato: HC2016A
UltraNuclease GMP-grade é expresso e purificado em Escherichia coli (E.coli) por engenharia genética e preparado em ambientes GMP.Pode reduzir a viscosidade do sobrenadante celular e do lisado celular em pesquisas científicas, aumentar a eficiência da purificação de proteínas e melhorar a pesquisa funcional de proteínas.O produto também pode reduzir os resíduos de ácido nucleico do hospedeiro para grau pg, melhorando o desempenho e a segurança de produtos biológicos de aplicações, incluindo purificação de vírus, fabricação de vacinas e fabricação de produtos farmacêuticos de proteínas/polissacarídeos.Além disso, o produto também pode ser aplicado para prevenir a aglomeração de células mononucleares do sangue periférico humano (PBMC) na terapia celular e no desenvolvimento de vacinas.
UltraNuclease é fornecido na forma de reagente esterilizado, eluído em tampão (Tris-HCL 20mM pH 8,0, MgCl2 2mM, NaCl 20 mM, glicerina 50%), com aparência de um líquido transparente e incolor.Este produto é produzido de acordo com os requisitos do processo GMP e fornecido na forma líquida.
Componentes
UltraNuclease grau GMP (250 U/μL)
Condições de armazenamento
O produto é enviado com gelo seco e pode ser armazenado a -25°C~-15°C por dois anos.
Se o produto for aberto e armazenado a 4°C por mais de uma semana, recomendamos filtrarproduto para evitar contaminação microbiana.
Especificações
| Host de Expressão | E. coli recombinante com gene UltraNuclease |
| Peso molecular | 26,5 kDa |
| ponto soelétrico | 6,85 |
| Pureza | ≥99% (SDS-PAGE) |
| Buffer de armazenamento | Tris-HCL 20 mM pH 8,0, MgCl2 2 mM, NaCl 20 mM, 50% de glicerina |
|
Definição de Unidade | A definição de uma unidade de atividade (U) é a quantidade de enzima usada paraalterar o valor de absorção de ΔA260 em 1,0 em 30 minutos em um recipiente de 2,625 mLsistema de reação a 37 ℃ com pH de 8,0 (equivalente à digestão completa de37 μg de DNA de esperma de salmão em oligonucleotídeos). |
Instruções
1. Amostra Coleção
Células aderentes: retirar o meio, lavar as células com PBS e retirar o sobrenadante.
Células em suspensão: coletar as células por centrifugação, lavar as células com PBS, centrifugar a 6.000rpm por 10 min, colete o pellet.
Escherichia coli: coletar as bactérias por centrifugação, lavar uma vez com PBS, centrifugar a 8.000rpm por 5 min e coletar o pellet.
2. Tratamento de amostras
Trate os pellets celulares coletados com tampão de lise na proporção de massa(g) para volume(mL)1:(10-20), ou por métodos mecânicos ou químicos em gelo ou em temperatura ambiente (1g de pellet celular contém cerca de
109 células).
3. Tratamento Enzimático
Adicione MgCl 1-5mM ao sistema de reação e ajuste o pH para 8-9.
Adicione UltraNuclease de acordo com a proporção de 250 unidades para digerir 1 g de pellets celulares, incube a 37°C por mais de 30 minutos.Consulte o formulário “Tempo de reação recomendado” para escolher oduração do tratamento.
4. Sobrenadante Coleção
Centrifugar a 12.000 rpm por 30 minutos e coletar o sobrenadante.
Nota: Se a solução for ácida ou alcalina, ou contiver altas concentrações de sal, detergentes oudesnaturantes, aumente a dosagem da enzima ou prolongue o tempo de tratamento de acordo.
Condições de reação recomendadasnós
| Parâmetro | Condição ideal | Condicionador Eficaz |
| Mg²+Concentração | 1-5mm | 1-10mm |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| Temperatura | 37°C | 0-42℃ |
| Concentração TDT | 0-100mm | >0mm |
| Concentração de Mercaptoetanol | 0-100mm | >0mm |
| Concentração de cátions monovalentes | 0-20mm | 0-150mm |
| Concentração de fosfato | 0-10mm | 0-100mm |
Recomendado Reação Tempo (37°C, 2 mM Mg²+, pH 8,0)
| Quantidade UltraNuclease (Concentração Final) | Tempo de reação |
| 0,25 U/mL | >10h |
| 2,5 U/mL | >4h |
| 25 U/mL | 30 minutos |
Notas:
Por favor, use o EPI necessário, como jaleco e luvas, para garantir sua saúde e segurança!
