Ultra Nuclease
UltraNuclease é uma endonuclease geneticamente modificada derivada de Serratia marcescens, que é capaz de degradar DNA ou RNA, de cadeia dupla ou simples, linear ou circular sob uma ampla gama de condições, degradar completamente ácidos nucleicos em oligonucleotídeos 5'-monofosfato com comprimento de 3-5 bases .Após a modificação da engenharia genética, o produto foi fermentado, expresso e purificado em Escherichia coli (E. coli), o que reduz a viscosidade do sobrenadante celular e do lisado celular na pesquisa científica, mas também melhora a eficiência da purificação e a pesquisa funcional da proteína.Também pode ser usado na terapia genética, purificação de vírus, produção de vacinas, indústria farmacêutica de proteínas e polissacarídeos como reagente de remoção de ácido nucleico de resíduo hospedeiro.
Características do produto
Nº CAS | 9025-65-4 |
CE Não. | |
Peso molecular | 30kDa |
Ponto de isolação eletrica | 6,85 |
Pureza Proteica | ≥99%(SDS-PAGE e SEC-HPLC) |
Atividade específica | ≥1.1×106U/mg |
Temperatura ideal | 37ºC |
pH ideal | 8,0 |
ProteaseActivity | negativo |
Carga biológica | <10UFC/100.000U |
Proteína residual da célula hospedeira | ≤10 ppm |
Metal pesado | ≤10 ppm |
Endotoxina Bacteriana | <0,25EU/1000U |
Buffer de armazenamento | Tris-HCl 20 mM, pH 8,0, MgCl2 2 mM, 20 mM NaCl, 50% Glicerol |
Condições de armazenamento
Transporte ≤0 ° C ; -25 ~ -15 ° C Armazenamento, validade de 2 anos (evitar congelamento-descongelamento).
Definição de Unidade
A quantidade de enzima usada para alterar o valor de absorção de △A260 em 1,0 em 30 minutos a 37 °C, pH 8,0, equivalente a 37 μg de DNA de esperma de salmão digerido por corte em oligonucleotídeos, foi definida como uma unidade ativa (U).
Controle de qualidade
Proteína residual da célula hospedeira: kit ELISA
•Protease Resíduos: 250KU/mL UltraNuclease reagiu com substrato por 60min, nenhuma atividade foi detectada.
•Endotoxina Bacteriana: LAL-Test, Farmacopeia da República Popular da China Volume 4 (Edição 2020) método de teste de limite de gel.Regras Gerais (1143).
•Carga biológica: Farmacopeia da República Popular da China Volume 4 (Edição 2020) - Geral
Regras para teste de esterilidade (1101), Padrão Nacional da RPC, GB 4789.2-2016.
•Metal pesado:ICP-AES, HJ776-2015.
Operação
A atividade da UltraNuclease foi significativamente inibida quando a concentração de SDS estava acima de 0,1% ou EDTA
a concentração foi superior a 1 mM. O surfactante Triton X-100, Tween 20 e Tween 80 não teve efeito na nuclease
propriedades quando a concentração estava abaixo de 1,5%.
Operação | Operação ideal | Operação válida |
Temperatura | 37°C | 0-45℃ |
pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
Mg2+ | 1-2mM | 1- 15mM |
TDT | 0-100mm | >100mM |
2-Mercaptoetanol | 0-100mm | >100mM |
Íon metálico monovalente (Na+, K+ etc.) | 0-20mM | 0-200mM |
PO43- | 0-10mM | 0-100mm |
Uso e dosagem
• Remover o ácido nucleico exógeno dos produtos vacinais, reduzir o risco de toxicidade residual do ácido nucleico e melhorar a segurança do produto.
• Reduza a viscosidade do líquido de alimentação causada pelo ácido nucleico, reduza o tempo de processamento e aumente o rendimento de proteína.
• Remover o ácido nucleico que envolve a partícula (vírus, corpo de inclusão, etc.), o que é propício
para a liberação e purificação da partícula.
Tipo Experimental | Produção de Proteína | Vírus, Vacina | Drogas Celulares |
Número de células | 1g de peso úmido da célula (ressuspenso com tampão de 10ml) | Fermentação 1L sobrenadante líquido | Cultura 1L |
Dosagem Mínima | 250U | 100U | 100U |
Dosagem recomendada | 2500U | 25000U | 5000U |
• O tratamento com nuclease pode melhorar a resolução e recuperação da amostra para cromatografia em coluna, eletroforese e análise de blotting.
• Na terapia genética, o ácido nucleico é removido para obter vírus adeno-associados purificados.