Kit de extração de DNA/RNA viral
Este kit é adequado para a extração rápida de DNA/RNA viral de alta pureza de amostras como esfregaços nasofaríngeos, esfregaços ambientais, sobrenadantes de culturas celulares e sobrenadantes de homogeneizados de tecidos.O kit é baseado na tecnologia de purificação por membrana de sílica que elimina a necessidade de usar solventes orgânicos de fenol/clorofórmio ou precipitação demorada com álcool para extrair DNA/RNA viral de alta qualidade.Os ácidos nucleicos obtidos estão livres de impurezas e prontos para uso em experimentos posteriores, como transcrição reversa, PCR, RT-PCR, PCR em tempo real, sequenciamento de próxima geração (NGS) e Northern blot.
Condições de armazenamento
Armazenar entre 15 e 25 ℃ e transportar em temperatura ambiente
Componentes
| Componentes | 100RXNS |
| Buffer VL | 50ml |
| Tampão RW | 120ml |
| ddH2O livre de RNase | 6ml |
| Colunas de RNA FastPure | 100 |
| Tubos de Coleta (2ml) | 100 |
| Tubos de coleta sem RNase (1,5 ml) | 100 |
Buffer VL:Fornece um ambiente para lise e ligação.
Buffer RW:Remova proteínas residuais e outras impurezas.
ddH2O livre de RNase:Elute DNA/RNA da membrana na coluna de rotação.
Colunas de RNA FastPure:Adsorver especificamente DNA/RNA.
Tubos de coleta 2 ml:Colete o filtrado.
Tubos de coleta sem RNase 1,5 ml:Colete DNA/RNA.
Formulários
Esfregaços nasofaríngeos, esfregaços ambientais, sobrenadantes de culturas celulares e sobrenadantes de homogeneizados de tecidos.
Mater autopreparadoiais
Pontas de pipeta sem RNase, tubos de centrífuga de 1,5 ml sem RNase, centrífuga, misturador de vórtice e pipetas.
Processo Experimental
Execute todas as etapas a seguir em uma cabine de biossegurança.
1. Adicione 200 μl da amostra a um tubo de centrífuga sem RNase (prepare com PBS ou NaCl a 0,9% em caso de amostra insuficiente), adicione 500 μl de Tampão VL, misture bem agitando em vórtex durante 15 – 30 segundos e centrifugue. brevemente para coletar a mistura no fundo do tubo.
2. Coloque as colunas FastPure RNA em tubos de coleta de 2 ml.Transfira a mistura da Etapa 1 para Colunas FastPure RNA, centrifugue a 12.000 rpm (13.400 × g) por 1 min e descarte o filtrado.
3. Adicione 600 μl de tampão RW às colunas FastPure RNA, centrifugue a 12.000 rpm (13.400 × g) por 30 segundos e descarte o filtrado.
4. Repita a Etapa 3.
5. Centrifugue a coluna vazia a 12.000 rpm (13.400 × g) durante 2 min.
6. Transfira cuidadosamente as colunas FastPure RNA para um novo tubo de colheita isento de RNase de 1,5 ml (fornecido no kit) e adicione 30 – 50 μl de ddH2O isento de RNase ao centro da membrana sem tocar na coluna.Deixar repousar à temperatura ambiente durante 1 min e centrifugar a 12.000 rpm (13.400 × g) durante 1 min.
7. Descarte as colunas FastPure RNA.O DNA/RNA pode ser usado diretamente para ensaios subsequentes ou armazenado a -30~ -15°C por um curto período ou -85 ~-65°C por um período mais longo.
Notas
Apenas para uso em pesquisa.Não deve ser usado em procedimentos de diagnóstico.
1. Equilibre as amostras à temperatura ambiente antecipadamente.
2. Os vírus são altamente infecciosos.Por favor, certifique-se de que todas as precauções de segurança necessárias sejam tomadas antes do experimento.
3. Evite congelamentos e descongelamentos repetidos da amostra, pois isso pode levar à degradação ou à redução do rendimento do DNA/RNA viral extraído.
4. O equipamento autopreparado inclui pontas de pipeta sem RNase, tubos de centrífuga de 1,5 ml sem RNase, centrífuga, misturador de vórtice e pipetas.
5. Ao usar o kit, use um jaleco, luvas de látex descartáveis e uma máscara descartável e use consumíveis livres de RNase para minimizar o risco de contaminação por RNase.
6. Execute todas as etapas em temperatura ambiente, salvo indicação em contrário.
Mecanismo e fluxo de trabalho
