2×Sensi Direct Premix-UNG (sonda qPCR)

Número do gato: HCB5151A

O SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) foi projetado para realizar PCR diretamente de amostras sem extração de DNA ou preparação de amostras.Este reagente consiste em DNA polimerase de início quente, uracil DNA glicosilase (UNG), inibidor de RNase, MgCl₂, dNTPs (com dUTP em vez de dTTP) e estabilizadores, para PCR quantitativo (qPCR).Este reagente apresenta alta tolerância a inibidores e, portanto, pode ser aplicado diretamente na detecção de amostras como esfregaço de garganta, saliva, sangue total anticoagulado, plasma e soro sem extração de DNA.O reagente utiliza tampão proprietário para qPCR com enzimas mistas de DNA polimerase anti-inibitória e enzima UNG.Portanto, pode obter uma boa amplificação de genes alvo em amostras contendo inibidores e inibir a amplificação falso positiva causada por resíduos de PCR e poluição por aerossol.Este reagente é compatível com a maioria dos instrumentos de PCR quantitativos fluorescentes, como Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche e assim por diante.

Componentes

1. Mistura de enzima/UNG 50×SensiDirect

2. 2×tampão de pré-mistura SensiDirect (dUTP)

Condições de armazenamento

Todos os componentes devem ser mantidos a -20°C para armazenamento de longo prazo e a 4°C por até 3 meses.Misture bem após descongelar e centrifugue antes de usar.Evite congelamentos e descongelamentos frequentes.

Protocolo de Ciclismo

Instruções de pipetagem

1. A concentração final do primer é geralmente 0,2μM.Para melhores resultados, a concentração do primer pode ser otimizada na faixa de 0,2-1μM.

2. Geralmente, a concentração da sonda pode ser otimizada dentro da faixa de 0,1-0,3μM.A concentração ideal da sonda está relacionada ao instrumento de amplificação por PCR em tempo real, ao tipo de sonda e ao tipo de substância de marcação fluorescente.Consulte o manual do instrumento ou os requisitos específicos de cada sonda fluorescente.

3. Diferentes tipos de amostras contêm diferentes tipos e conteúdos de inibidor e número de cópias do gene alvo.O volume da amostra deve ser considerado pela condição real.Faça uma diluição da amostra adicionando água livre de nuclease ou tampão TE, se necessário.

4. Volume recomendado de diferentes amostras:

Controle de qualidade

1. Detecção de função: sensibilidade, especificidade e repetibilidade do qPCR.

2. Sem atividade de nuclease exógena: sem endonuclease exógena e poluição por exonuclease.

Notas do Produto

1. Este produto emprega um novo tipo de DNA polimerase de inicialização a quente, que pode ser ativado em 1-5 minutos. Como seu tampão de reação foi otimizado, é mais adequado para PCR quantitativo de fluorescência dupla ou múltipla usando o método de sonda.

2. Se o valor Rn da amplificação por PCR for muito baixo ou a amplificação for obviamente inibida, diminuir a quantidade da amostra, aumentar o volume de reação ou diluição anterior da amostra pode melhorar os resultados.

3. A coleta de sangue, saliva, urina, esfregaço de garganta, etc. deve seguir os requisitos dos critérios clínicos, e amostras frescas podem ser usadas para prevenir a degradação do ácido nucleico.

4. Dado que diferentes amplicons têm diferentes eficiências de utilização para dUTP e sensibilidade para UNG, os reagentes devem ser optimizados se a sensibilidade de detecção diminuir quando se utiliza o sistema UNG.Entre em contato conosco para suporte técnico, se necessário.

5. Para evitar a amplificação de produtos de PCR de transferência entre reações de uma etapa, são necessárias uma área experimental dedicada e uma pipeta para amplificação.Opere com luvas e troque-as frequentemente e não abra o tubo de reação após a amplificação por PCR.