5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG

Número do gato: HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) é uma mistura baseada em sonda de um tubo altamente estável, adequada para transcrição reversa em uma etapa e PCR quantitativa (qRT-PCR).Suporta pré-mistura de primers e sondas e permanece estável após longo tempo de armazenamento em baixa temperatura.A amostra a ser testada pode ser adicionada diretamente durante o uso, sem operação adicional de abertura/pipetagem do tubo.Este produto fornece componentes, por exemplo, DNA polimerase de início a quente, M-MLV, uracil DNA glicosilase termolábil (TS-UNG), inibidor de RNase, MgCl₂, dNTPs (com dUTP em vez de dTTP) e estabilizadores.Com a transcriptase reversa de amplificação rápida geneticamente modificada e a DNA polimerase, é possível completar a amplificação por PCR em 20-40 minutos.Este reagente utiliza tampão especial para qPCR com enzimas mistas de enzima de amplificação anti-inibitória e enzima UNG.Portanto, pode obter uma boa amplificação dos genes alvo e evitar falsas amplificações causadas por resíduos de PCR e poluição por aerossol.Este reagente é compatível com a maioria dos instrumentos de PCR quantitativos de fluorescência de fabricantes como Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad e Roche.

Componente

1.25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix

2.5×tampão de pré-mistura Neoscript Fast RT (dUTP)

Condições de armazenamento

Todos os componentes devem ser mantidos a -20°C para armazenamento de longo prazo e a 4°C por até 3 meses.Misture bem após descongelar e centrifugue antes de usar.Evite congelamentos e descongelamentos frequentes.

Preparação do sistema de reação qRT-PCR

1) a.A concentração final do primer é geralmente 0,2μM.Para melhores resultados, a concentração do primer pode ser otimizada na faixa de 0,2-1μM.Geralmente, a concentração da sonda pode ser otimizada na faixa de 0,1-0,3 μM.

2) b.Ao utilizar um procedimento de PCR rápido, o aumento da concentração de primers e sondas pode resultar em melhores resultados de amplificação e sua proporção deve ser otimizada adequadamente.

3) Diferentes tipos de amostras contêm diferentes tipos e conteúdos de inibidor e número de cópias do gene alvo.O volume da amostra deve ser considerado pela condição real.Faça uma diluição da amostra com água livre de nuclease ou tampão TE, se necessário.

Reação Ccondições

Controle de qualidade

1.Detecção de função: sensibilidade, especificidade e repetibilidade do qPCR.

2.Nenhuma atividade de nuclease exógena: nenhuma endonuclease exógena e poluição por exonuclease.

Notas

1.A taxa de amplificação da DNA polimerase rápida não é inferior a 1kb/10s.Diferentes instrumentos de PCR têm diferentes velocidades de aquecimento e resfriamento, modos de controle de temperatura e condutividade térmica e, portanto, a otimização da concentração de seu primer/sonda e do método de execução em combinação com seu instrumento de PCR rápido específico é essencial.

2.Este produto apresenta ampla aplicabilidade e é adequado para diagnóstico molecular de alta sensibilidade.O método de PCR em três etapas é recomendado para primers com baixa temperatura de recozimento ou para amplificação de fragmentos longos acima de 200 pb.

3.Uma vez que diferentes amplicons têm diferentes eficiências de utilização de dUTP e diferentes sensibilidades ao UNG, os reagentes devem ser optimizados se a sensibilidade de detecção diminuir quando se utiliza o sistema UNG.Entre em contato conosco para suporte técnico, se necessário.

4.Para evitar a amplificação de produtos de PCR de carryover, são necessárias uma área experimental e uma pipeta dedicadas para a amplificação.Opere com luvas e troque-as com frequência e não abra o tubo PCR após a amplificação.