BspQI
BspQI pode ser expresso de forma recombinante em E. coli que pode reconhecer locais específicos e é produzido sob
BspQI, uma endonuclease de restrição de endonuclease de restrição IIs, é derivada de uma cepa recombinante de E. coli que carrega o gene BspQI clonado e modificado de Bacillus sphaericus.Ele pode reconhecer locais específicos, e a sequência de reconhecimento e os locais de clivagem são os seguintes:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
características do produto
1. Alta atividade, digestão rápida;
2. Baixa atividade estelar, garantindo corte preciso tipo “bisturi”;
3. Sem BSA e livre de origem animal;
Sensibilidade de Metilação
Dsou metilação:Não sensível;
Dcm metilação:Não sensível;
Metilação CpG:Não sensível;
Condições de armazenamento
O produto deve ser enviado ≤ 0℃;Armazene em condições de -25 ~ - 15 ℃.
Buffer de armazenamento
Tris-HCl 20 mM, EDTA 0,1 mM, KCl 500 mM, ditiotreitol 1,0 mM, albumina recombinante 500 µg/ml, Trition X-100 a 0,1% e glicerol a 50% (pH 7,0 @ 25°C).
Definição de Unidade
Uma unidade é definida como a quantidade de enzima necessária para digerir 1 µg de DNA de controle interno em 1 hora a 50°C em um volume total de reação de 50 µL.
Controle de qualidade
Ensaio de Pureza Proteica (SDS-PAGE):A pureza do BspQI foi ≥95% determinada por análise de SDS-PAGE.
RNase:10U de BspQI com 1,6μg de RNA MS2 por 4 horas a 50°C não produz degradação conforme determinado por eletroforese em gel de agarose.
Atividade DNase não específica:10U de BspQI com 1μg λ DNA a 50°C por 16 horas, em comparação com 50°C por 1 hora, não produz excesso de DNA, conforme determinado por eletroforese em gel de agarose.
Ligadura e Recorte:Após digestão de 1 μg de λDNA com 10U de BspQI, os fragmentos de DNA podem ser ligados com T4 DNA ligase a 16ºC.E estes fragmentos ligados podem ser recortados com BspQI.
E. coli ADN: A detecção de qPCR TaqMan específica de rDNA de E. coli 16s mostrou que o resíduo do genoma de E. coli ≤ 0,1pg/ul.
Resíduo de proteína hospedeira:≤ 50 ppm
Bacteriana Endotoxina: Teste LAL, de acordo com a Farmacopeia Chinesa IV edição 2020, método de teste de limite de gel, regra geral (1143).O conteúdo de endotoxinas bacterianas deve ser ≤10 EU/mg.
Sistema e condições de reação
| Componente | Volume |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| ADN | 1 μg |
| 10 x tampão BspQ I | 5 μL |
| dd H2O | Até 50 μL |
Condições de reação: 50 ℃, 1~16h.
Inativação por calor:80°C por 20 min.
O sistema e as condições de reação recomendados podem fornecer um efeito de digestão enzimática relativamente bom, que é apenas para referência, consulte os resultados experimentais para obter detalhes.
Aplicação do produto
Digestão por endonuclease de restrição, clonagem rápida.
Notas
1. O volume da enzima ≤ 1/10 do volume da reação.
2. A atividade estelar pode ocorrer quando a concentração de glicerol é superior a 5%.
3. A atividade de clivagem pode ocorrer quando o substrato estiver abaixo da proporção recomendada.
