DNase I (sem Rnase) (5u/ul)
Número do gato: HC4007A
DNase I (Desoxirribonuclease I) é uma endodesoxirribonuclease que pode digerir DNA de fita simples ou dupla.Ele reconhece e cliva ligações fosfodiéster para produzir monodesoxinucleotídeos ou oligodesoxinucleotídeos de fita simples ou dupla com grupos fosfato no terminal 5' e hidroxila no terminal 3'.A atividade da DNase I depende do Ca2+e pode ser ativado por íons metálicos divalentes, como Mn2+e Zn2+.5 mM de Ca2+protege a enzima da hidrólise.Na presença de Mg2+, a enzima poderia reconhecer e clivar aleatoriamente qualquer local em qualquer fita de DNA.Na presença de Mn2+, as fitas duplas de DNA podem ser simultaneamente reconhecidas e clivadas quase no mesmo local para formar fragmentos de DNA de extremidade plana ou fragmentos de DNA de extremidade pegajosa com 1-2 nucleotídeos salientes.
Componentes
| Nome | 0,1KU | 1KU | 5KU | 50 KU |
| DNase I, livre de RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10ml |
| 10×tampão DNase I | 1mL | 1mL | 5×1mL | 5 × 10 mL |
Condições de armazenamento
-25℃~-15℃ para armazenamento;Transporte sob bolsas de gelo.
Instruções
1. Prepare a solução de reação no tubo livre de RNase de acordo com as proporções listadas abaixo:
| Componente | Volume |
| ARN | X µg |
| 10 × Tampão DNase I | 1μL |
| DNase I, livre de RNase (5U/μL) | 1 U por µg de RNA① |
| ddH2O | Até 10μL |
Nota: ①Calcule o volume de DNase I que precisa ser adicionado com base na quantidade de RNA.
2. 37 ℃ por 15 minutos;
3. Adicione EDTA 0,5 M à concentração final de 2,5 mM ~ 5 mM e aqueça a 65 ℃ por 10 minutos para interromper a reação.A amostra pode ser usada diretamente para a próxima reação, como transcrição reversaexperimentar.
Definição de Unidade
Uma unidade é definida como a quantidade de enzima que degradará completamente 1 µg de pBR322DNA em 10 minutos a 37°C.
Controle de qualidade
RNase:5U de DNase I com 1,6 µg de RNA MS2 por 4 horas a 37 ℃ não produz degradação, poisdeterminado por eletroforese em gel de agarose.
Notas
1. Prepare 0,5MEDTA sozinho.
2. Use 1U de DNase I por µg de RNA.No entanto, se o RNA for inferior a 1 µg, use 1U DNase I.
3. Coloque a enzima no gelo durante a operação.
