Superstart qPCR Premix plus-UNG
Número do gato: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG é um reagente especializado projetado para reações qualitativas e quantitativas de PCR em tempo real usando detecção baseada em sonda, desenvolvido especificamente para processos de liofilização.Ele contém uma nova enzima hot-start Hotstart Taq plus (DG), que tem sua atividade enzimática Taq selada à temperatura ambiente, inibindo efetivamente a amplificação não específica causada pelo recozimento inespecífico do primer ou formação de dímeros do primer sob condições de baixa temperatura, melhorando assim a especificidade da reação de amplificação.Este reagente usa um tampão específico de qPCR otimizado e um sistema anticontaminação UNG/dUTP para obter uma inicialização a quente rápida, melhorando significativamente a eficiência e a sensibilidade das reações de qPCR.Ele pode obter boas curvas padrão em uma ampla gama de áreas de quantificação e realizar a quantificação com precisão, evitando efetivamente a amplificação de falsos positivos causada por produtos residuais de PCR ou contaminação por aerossol.Este reagente é compatível com a maioria dos instrumentos de PCR quantitativos fluorescentes de fabricantes como Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad e Roche etc., e apresenta boa estabilidade na forma liofilizada.
Composição do reagente
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+grátis) (DG)
2. MgCl 250 mM2
3. 4×lioprotetor (opcional)
Condições de armazenamento
Armazenamento de longo prazo a -20°C;pode ser armazenado a 4 ℃ por até 3 meses.Misture bem antes de usar eEvite ciclos repetidos de congelamento e descongelamento.
Protocolo de Ciclismo
| Procedimento | Temperatura. | Tempo | Ciclo |
| Digestão | 50°C | 2 minutos | 1 |
| Ativação da polimerase | 95°C | 1~5 minutos | 1 |
| Desnaturar | 95°C | 10~20 segundos | 40-50 |
| Recozimento e Extensão | 56~64℃ | 20~60 segundos | 40-50 |
Sy de reação líquida qPCRpreparação de caule
|
Composição |
Volume de 25µL |
Volume de 50µL |
Concentração Final |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+grátis) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM de MgCl22 | 0,45µL | 0,9µL | 4,5mm |
| 4×lioprotetor1 | 6,25 µL | 12,5 µL | 1× |
| 25×Mistura Primer-Sonda2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Modelo de DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Para 25µL | Para 50µL | —— |
1. Uma concentração final de 0,2μM para primers geralmente produz bons resultados;quando o desempenho da reação for ruim, ajuste a concentração do primer na faixa de 0,2-1μM conforme necessário.A concentração da sonda é normalmente otimizada na faixa de 0,1-0,3 μM por meio de experimentos de gradiente para encontrar combinações ideais.
2. O número de cópias dos genes alvo contidos nos diferentes tipos de modelos varia;se necessário, a diluição gradiente pode ser realizada para determinar a quantidade ideal de adição do modelo.
3. Este sistema pode ser liofilizado;quando os clientes usam este sistema sem requisitos de liofilização, 4 × lioprotetor pode ser adicionado seletivamente; se houver necessidade de produtos liofilizados, durante a validação do desempenho do produto na fase de reagentes líquidos, ele deve adicionar 4 × lioprotetor para garantir a consistência com os componentes do sistema liofilizado e efeitos.
Quando o sistema é usadod para liofilização, prepare o sistema as seguindo:
| Composição | 25μL Sistema de reação |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+grátis) (DG) | 5µL |
| 250mM de MgCl22 | 0,45µL |
| 4×lioprotetor | 6,25 µL |
| 25×Mistura Primer-Sonda | 1µL |
| ddH2O | Para 18 ~ 20 µL |
* Caso sejam necessários outros sistemas de liofilização, consulte separadamente.
Processo de liofilizaçãoss
| Procedimento | Temperatura. | Tempo | Doença | Pressão |
| Pré-congelamento | 4℃ | 30 minutos | Segurar |
1 caixa eletrônico |
| -50°C | 60 minutos | Resfriamento | ||
| -50°C | 180 minutos | Segurar | ||
| Secagem Primária | -30℃ | 60 minutos | Aquecimento |
Vácuo final |
| -30℃ | 70 minutos | Segurar | ||
| Secagem Secundária | 25℃ | 60 minutos | Aquecimento |
Vácuo final |
| 25℃ | 300 minutos | Segurar |
2. O processo de liofilização acima é apenas para referência.Diferentes tipos de produtos e diferentes liofilizadores têm parâmetros diferentes, portanto os ajustes podem ser feitos de acordo com as necessidades reais.condições durante o uso.
3. Diferentes processos de liofilização podem ser adequados para diferentes tamanhos de lote de liofilizadoprodutos, portanto, testes de validação suficientes devem ser realizados quando usados para produção em larga escala.
Instruções para usar liofilizarpó
1. Centrifugue brevemente o pó liofilizado;
2. Adicione o modelo de ácido nucleico ao pó liofilizado e adicione água até 25 µL;
3. Misture bem por centrifugação e coloque em funcionamento na máquina.
Controle de qualidade:
1. Testes funcionais: sensibilidade, especificidade, reprodutibilidade do qPCR.
2. Sem atividade de nuclease exógena, sem contaminação exógena de endo/exonuclease.
Informação técnica:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG usa uma nova enzima de inicialização a quente que permite uma inicialização a quente rápida em 1 a 5 minutos;através de formulação de tampão especial, é adequado para reações de PCR quantitativas fluorescentes multiplex.
2. Possui maior especificidade, o que melhora significativamente a sensibilidade da detecção quantitativa do limite de PCR de fluorescência, fazendo com que as curvas de amplificação sejam normalizadas, o valor de fluorescência obtém uma melhoria óbvia em modelos de baixa concentração, adequados como reagentes de detecção quantitativa de PCR de fluorescência de alta sensibilidade.
3. Para primers com temperatura de recozimento mais baixa ou fragmentos maiores que 200 pb, recomenda-se o método de 3 etapas.
4. A eficiência de utilização do dUTP e a sensibilidade à enzima UNG diferem para diferentes genes alvo, portanto, se o uso do sistema UNG levar a uma diminuição na sensibilidade de detecção, o sistema de reação deverá ser ajustado e otimizado.Se for necessário suporte técnico, entre em contato com nossa empresa.
5. Use áreas e pipetas dedicadas antes e depois da amplificação, use luvas durante a operação e substitua-as com frequência;não abra o tubo de reação após a conclusão da PCR para minimizar a contaminação das amostras pelos produtos de PCR.
