Pré-mistura de sonda RT-qPCR rápida em uma etapa-UNG
Número do gato: HCR5143A
O One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) é um kit de detecção rápida RT-qPCR baseado em sonda, adequado para PCR quantitativo single-plex ou multiplex usando RNA como modelo (como vírus RNA).Este produto usa uma nova geração de Taq DNA Polimerase modificada por anticorpos e Transcriptase Reversa dedicada de uma etapa, com um buffer otimizado para amplificação rápida, que possui velocidade de amplificação mais rápida, maior eficiência e especificidade de amplificação.Ele suporta amplificação balanceada em single-plex e multiplex de amostras de baixa e alta concentração em um curto espaço de tempo.
Componentes
1. Tampão 5×RT-qPCR (U+)
2. Mistura enzimática (U+)
Notas:
a.Tampão 5×RT-qPCR (U+)inclui dNTP e Mg2+;
b.A mistura enzimática (U+) inclui transcriptase reversa, DNA polimerase Hot Start Taq, inibidor de RNase e UDG;
c.Use pontas RNase-Free, tubos EP, etc.
Antes de usar, misture bem o buffer 5×RT-qPCR (U+).Se houver alguma precipitação após o descongelamento, espere o tampão retornar à temperatura ambiente, misture e dissolva e depois use-o normalmente.
Condições de armazenamento
O produto é enviado com gelo seco e pode ser armazenado a -25 ~ -15 ℃ por 1 ano.
Instruções
1. Reação Sistema
| Componentes | Volume (20 μL reação) |
| 2 × tampão RT-qPCR | 4μL |
| Mistura enzimática (U+) | 0,8μL |
| Primer Avançar | 0,1 ~ 1,0μM |
| Primer reverso | 0,1 ~ 1,0μM |
| Sonda TaqMan | 0,05~0,25μM |
| Modelo | X μL |
| Água sem RNase | até 25μL |
Notas: O volume de reação é 10-50μL.
2. Protocolo de Ciclismo (Spadrão)
| Ciclo etapa | Temperatura. | Tempo | Ciclos |
| Transcrição reversa | 55 ℃ | 10 minutos | 1 |
| Desnaturação Inicial | 95 ℃ | 30 segundos | 1 |
| Desnaturação | 95 ℃ | 10 segundos | 45 |
| Recozimento/Extensão | 60 ℃ | 30 segundos |
| Protocolo de Ciclismo (Rápido) Ciclo etapa |
Temperatura. |
Tempo |
Ciclos |
| Transcrição reversa | 55 ℃ | 5 minutos | 1 |
| Desnaturação Inicial | 95 ℃ | 5 segundos | 1 |
| Desnaturação | 95 ℃ | 3 segundos | 43 |
| Recozimento/Extensão | 60 ℃ | 10s |
Notas:
a.A temperatura de transcrição reversa está entre 50°C e 60°C, aumentar a temperatura ajuda a amplificar estruturas complexas e modelos de alto conteúdo de CG;
b.A temperatura ideal de recozimento precisa ser ajustada com base no valor Tm do primer e selecionar o menor tempo para coleta de sinal de fluorescência com base no instrumento Real Time PCR.
Notas
Por favor, use o EPI necessário, como jaleco e luvas, para garantir sua saúde e segurança!
