Enzimas UDG/UNG
UDG (uracil DNA glicosilase) pode catalisar a hidrólise da ligação N-glicosídica entre a base uracil e a estrutura açúcar-fosfato em ssDNA e dsDNA.Ele pode controlar facilmente a poluição por aerossóis e é adequado para sistemas comuns de biologia molecular, como PCR, qPCR, RT-qPCR e LAMP.
Especificações
| Host de Expressão | E. coli recombinante com gene de glicosilase de DNA de uracila |
| Peso molecular | 24.8kDa |
| Pureza | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Inativação por Calor | 95°C, 5~10 minutos |
| Definição de Unidade | Uma unidade (U) é definida como a quantidade de enzima necessária para catalisar a hidrólise de 1 μg dsDNA contendo dU em 30 minutos a 25 ℃. |
Armazenar
O produto deve ser armazenado a -25°C~-15°C por dois anos.
Instruções
1.Preparação da mistura de reação PCR de acordo com o seguinte sistema
| Componentes | Volume (μL) | Concentração final |
| Tampão 10×PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Lixiviação) | 1 | 0,2 mmol/lixiviação |
| Modelo de DNA | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA polimerase (5 U/μL) | 0,5 | 0,05 U/μL |
| Uracila DNA glicosilase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Até 50 | - |
Observação: De acordo com os requisitos experimentais, a concentração final de dUTP pode ser ajustada entre 0,2-0,6 mmol/L, e 0,2 mmol/L de dTTP pode ser adicionado seletivamente.
2.Procedimento de amplificação
| Etapa do ciclo | Temperatura | Tempo | Ciclos |
| Degradação de modelo contendo dU | 25℃ | 10 minutos | 1 |
| Ativação UDG, desnaturação inicial do modelo | 95°C | 5~10 minutos | 1 |
| Desnaturação | 95°C | 10 segundos |
30-35 |
| anelamento | 60°C | 20 segundos | |
| Extensão | 72℃ | 30seg/kb | |
| Extensão final | 72℃ | 5 minutos | 1 |
Observação: O tempo de reação a 25°C pode ser ajustado dentro de 5-10 minutos de acordo com os requisitos experimentais.
Notas
1.O UDG está ativo na maioria dos tampões de reação PCR.
2.As enzimas devem ser armazenadas em uma caixa de gelo ou em banho de gelo quando utilizadas, e devem ser armazenadas a -20°C imediatamente após o uso.
3.Por favor, use o EPI necessário, como jaleco e luvas, para garantir sua saúde e segurança!
