Warm Start Bst 2.0 DNA Polimerase (sem glicerol)
A Bst DNA polimerase V2 é derivada da DNA polimerase I de Bacillus stearothermophilus, que possui atividade de DNA polimerase 5′→3′ e forte atividade de substituição de cadeia, mas nenhuma atividade de exonuclease 5′→3′.A Bst DNA Polimerase V2 é ideal para deslocamento de fita, amplificação isotérmica LAMP (amplificação isotérmica mediada por loop) e sequenciamento rápido.Bst DNA polimerase V2 é uma versão hot-start baseada em Bst DNA polimerase V2 (HC5005A) obtida por tecnologia de modificação reversível, que pode inibir a atividade da DNA polimerase em temperatura ambiente, para que o sistema de reação possa ser operado e formulado em temperatura ambiente para evitar não -amplificação específica e melhora a eficiência da reação, e esta versão pode ser liofilizada.Além disso, sua atividade é liberada em altas temperaturas, não havendo necessidade de uma etapa de ativação separada.
Componentes
| Componente | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polimerase V2 (sem glicerol)(8U/μL) | 0,2 mL | 1ml | 10ml |
| Tampão 10×HC Bst V2 | 1,5ml | 2×1,5 mL | 3×10 mL |
| MgSO4(100mm) | 1,5ml | 2×1,5 mL | 2×10 mL |
Formulários
1.Amplificação isotérmica LAMP
2.Reação de deslocamento único de fita de DNA
3.Sequenciamento genético de alto GC
4.Sequenciamento de DNA em nível de nanograma.
Condição de armazenamento
Transporte abaixo de 0°C e armazenado entre -25°C~-15°C.
Definição de Unidade
Uma unidade é definida como a quantidade de enzima que incorpora 25 nmol de dNTP em material insolúvel em ácido em 30 minutos a 65°C.
Controle de qualidade
1.Ensaio de Pureza Proteica (SDS-PAGE):A pureza da Bst DNA polimerase V2 é ≥99% determinada por análise SDS-PAGE utilizando detecção de Coomassie Blue.
2.EindonucleaseAtividade:A incubação de uma reação de 50 μL contendo um mínimo de 8 U de Bst DNA polimerase V2 com 1 μg de λDNA por 16 horas a 37 ℃ não resulta em degradação detectável conforme determinado.
3.Atividade de Exonuclease:A incubação de uma reação de 50 μL contendo um mínimo de 8 U de Bst DNA polimerase V2 com 1 μg de DNA digerido λ -Hind Ⅲ por 16 horas a 37 ℃ não resulta em degradação detectável conforme determinado.
4.Atividade Nickase:A incubação de uma reação de 50 μL contendo um mínimo de 8 U de Bst DNA polimerase V2 com 1 μg de DNA pBR322 por 16 horas a 37°C não resulta em degradação detectável conforme determinado.
5.Atividade RNase:A incubação de uma reação de 50 μL contendo um mínimo de 8 U de Bst DNA polimerase V2 com 1,6 μg de RNA MS2 durante 16 horas a 37°C não resulta em degradação detectável conforme determinado.
6.E. coliADN:120 U de Bst DNA polimerase V2 são rastreados quanto à presença de DNA genômico de E. coli usando qPCR TaqMan com primers específicos para o locus 16S rRNA de E. coli.A contaminação do DNA genômico de E. coli é ≤1 cópia.
Reação da LÂMPADA
| Componentes | 25μL |
| Tampão 10×HC Bst V2 | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mm) | 1,5 μL |
| dNTPs (10mM cada) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Verde (25×)a | 1,0 μL |
| Mistura de primerb | 6 μL |
| Bst DNA Polimerase V2 (sem glicerol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Modelo | × μL |
| ddH₂O | Até 25 μL |
Notas:
1) uma.SYTOTM 16 Verde (25×): Conforme necessidade experimental, outros corantes podem ser utilizados como substitutos;
2) b.Mistura de primers: obtida misturando 20 µM de FIP, 20 µM de BIP, 2,5 µM de F3, 2,5 µM de B3, 5 µM de LF, 5 µM de LB e outros volumes.
Reação e Condição
1 × tampão HC Bst V2, a temperatura de incubação está entre 60°C e 65°C.
Inativação por Calor
80°C, 20 minutos
