Inibidor de Rnase
O inibidor de RNase murina é um inibidor de RNase murina recombinante expresso e purificado a partir de E.coli.Liga-se à RNase A, B ou C numa proporção de 1:1 através de ligação não covalente, inibindo assim a actividade das três enzimas e protegendo o ARN da degradação.No entanto, não é eficaz contra RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H ou RNase de Aspergillus.O inibidor murino de RNase foi testado por RT-PCR, RT-qPCR e mRNA IVT e foi compatível com várias transcriptases reversas comerciais, DNA polimerases e RNA polimerases.
Comparado aos inibidores de RNase humanos, o inibidor de RNase murino não contém duas cisteínas que são altamente sensíveis à oxidação que causa a inativação do inibidor.Isso o torna estável em baixas concentrações de DTT (menos de 1 mM).Esta característica o torna adequado para uso em reações onde altas concentrações de DTT são adversas à reação (por exemplo, RT-PCR em tempo real).
Aaplicação
Este produto pode ser amplamente utilizado em qualquer experimento onde a interferência da RNase seja possível para evitar a degradação do RNA, como:
1.Síntese da primeira fita de cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, etc.
2.Protege o RNA da degradação durante a transcrição/tradução in vitro (por exemplo, sistema de replicação viral in vitro).
3.Inibição da atividade da RNase durante a separação e purificação do RNA.
Condições de armazenamento
O produto pode ser armazenado a -25 ~ - 15 ℃, válido por 2 anos.
Buffer de armazenamento
KCl 50 mM, HEPES-KOH 20 mM (pH 7,6, 25 ℃), DTT 8 mM e 50% de glicerol.
Definição de unidade
A quantidade de inibidor de RNase murina necessária para inibir a atividade de 5 ng de ribonuclease A em 50% foi definida como uma unidade (U).
Peso molecular da proteína
O peso molecular do inibidor de RNase murino é de 50 kDa.
Controle de qualidade
Exonuclease Atividade:
40 U de inibidor de RNase murino com 1 μg de DNA digerido de λ -Hind III a 37°C por 16 horas não produz degradação conforme determinado por eletroforese em gel de agarose.
Atividade de endonuclease:
40 U de inibidor de RNase murino com 1 μg λ DNA a 37°C por 16 horas não produz degradação conforme determinado por eletroforese em gel de agarose.
Roubando Atividade:
40U de inibidor de RNase murino com 1μg de pBR322 a 37°C por 16 horas não produz degradação conforme determinado por eletroforese em gel de agarose.
RNase Atividade:
40U de inibidor de RNase murino com 1,6μg de RNA MS2 por 4h a 37°C não produz degradação conforme determinado por eletroforese em gel de agarose.
E.coli DNA:
40 U de inibidor de RNase murino são rastreados quanto à presença de DNA genômico de E. coli usando qPCR TaqMan com primers específicos para o locus 16S rRNA de E. coli.A contaminação por DNA genômico de E. coli é ≤ 0,1 pg/40 U.
Nnotas
1. Oscilação ou agitação violenta levará à inativação da enzima.
2. A faixa de temperatura ideal deste inibidor foi de 25-55 ℃ e foi inativada a 65 ℃ e acima.
3.As atividades de RNase H, RNase 1 e RNase T1 não foram inibidas pelo inibidor de RNase murino.
4.A inibição da atividade da RNase foi encontrada em uma ampla faixa de pH (pH 5-9 eram todos ativos), e a atividade mais alta foi observada em pH 7-8.
5. Como as ribonucleases normalmente retêm atividade sob condições desnaturantes, deve-se tomar cuidado para evitar a desnaturação das moléculas do inibidor de RNase que se complexaram com uma ribonuclease.Para evitar a libertação de ribonuclease activa, devem ser evitadas temperaturas superiores a 50 °C e concentrações elevadas de ureia ou outros agentes desnaturantes.
