Hotstart Taq DNA Polimerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (modificação de anticorpo) é uma DNA polimerase termoestável de início quente de Thermus aquaticus YT-1, que possui uma atividade de polimerase 5′→3′ e uma atividade de endonuclease de flap 5´.A Taq DNA polimerase de início quente é uma Taq DNA polimerase modificada por anticorpos Taq termolábeis.A modificação de anticorpos aumentou a especificidade, a sensibilidade e o rendimento da PCR.
Componentes
| Componente | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| Tampão 5×HC Taq | 4×1 mL | 4×10 mL | 4×50 mL | 5×400ml |
| Hot Start Taq DNA Polimerase (anticorpo modificado) (5 U/μL) | 0,1 mL | 1ml | 5ml | 10×5 mL |
Formulários
Tris-HCl 10 mM (pH 7,4 a 25 ℃), KCl 100 mM, EDTA 0,1 mM, ditiotreitol 1 mM, Tween20 a 0,5%, IGEPALCA-630 a 0,5% e glicerol a 50%.
Condição de armazenamento
Transporte abaixo de 0°C e armazenado entre -25°C~-15°C.
Definição de Unidade
Uma unidade é definida como a quantidade de enzima que incorpora 15 nmol de dNTP em material insolúvel em ácido em 30 minutos a 75°C.
Controle de qualidade
1.EndAtividade de onuclease:A incubação de 20 U de enzima com 4 μg de DNA pUC19 por 4 horas a 37°C não resultou em degradação detectável do DNA, conforme determinado por eletroforese em gel.
2.PCR Lambda de 5 kb:25 ciclos de amplificação por PCR de 5 ng de DNA Lambda com 1,25 unidades de Taq DNA Polimerase na presença de 200 µM de dNTPs e 0,2 µM de primers resultam no produto esperado de 5 kb.
3.Atividade de Exonuclease:A incubação de uma reação de 50 µl contendo um mínimo de 12,5 U de Taq DNA Polimerase com 10 nmol de oligonucleotídeo 5´-FAM por 30 minutos a 37°C não produz degradação detectável.
4.Atividade RNase:A incubação de 10 µL de reação contendo 20 U de enzima com 1μg de transcritos de RNA por 2 horas a 37°C não resultou em degradação detectável do RNA conforme determinado por eletroforese em gel.
5.Inativação por Calor:Não.
Sistema de reação
| Componentes | Volume |
| Modelo de DNAa | opcional |
| Primer direto de 10 μM | 0,5 μL |
| Primer reverso 10 μM | 0,5 μL |
| Mistura dNTP (10mM cada) | 0,5 μL |
| Tampão 5×HC Taq | 5 μL |
| Polimerase de DNA Taqb(5U/μL) | 0,125 μL |
| Água sem nuclease | Até 25 μL |
Notas:
1) uma.
| ADN | Quantia |
| Genômico | 1 ng-1 μg |
| Plasmídeo ou Viral | 1 página-1 ng |
2) b.A concentração ideal de Taq DNA Polimerase pode variar de 5 a 50 unidades/mL (0,1 a 0,5 unidades/25 µL de reação) em aplicações especializadas.
Protocolo de ciclagem térmica
PCR
| Etapa | Temperatura(°C) | Tempo | Ciclos |
| Desnaturação iniciala | 95 ℃ | 1-3 minutos | - |
| Desnaturação | 95 ℃ | 15-30 segundos | 30-35 ciclos |
| anelamentob | 45-68 ℃ | 15-60 segundos | |
| Extensão | 68 ℃ | 1kb/min | |
| Extensão Final | 68 ℃ | 5 minutos | - |
Notas:
1) Uma desnaturação inicial de 1 min a 95°C é suficiente para a maioria das amplificações.Para modelos difíceis, recomenda-se uma desnaturação mais longa de 2-3 minutos a 95°C.Com a PCR de colónias, recomenda-se uma desnaturação inicial de 5 minutos a 95°C.
2) A etapa de recozimento é normalmente de 15 a 60 s.A temperatura de recozimento é baseada na Tm do par de primers e é normalmente de 45-68°C.
