Mistura mestre colormétrica RT-LAMP HCB5204A
Este produto contém tampão de reação, mistura de enzimas RT (Bst DNA polimerase e transcriptase reversa resistente ao calor), protetores liofilizados e componentes corantes cromogênicos.Para usar basta usar o Buffer, a enzima da reação e o primer são misturados e adicionados ao molde;adicionar protetor liofilizado pode ser direto.Ele foi conectado a um liofilizador e liofilizado, e apenas os primers e templates foram adicionados quando utilizados.Este kit fornece uma detecção visual rápida e clara da amplificação, cuja reação negativa é indicada em vermelho e a reação positiva é indicada por uma mudança para amarelo.
Componente
| Componente | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Tampão de amplificação mediado por loop (com corante) | 0,96 mL | 4,80 mL×2 | 9,60 mL×10 |
| Mistura de enzimas RT | 270 μL | 2,70ml | 2,70 mL×10 |
| Protetor liofilizado | 0,96 mL×2 | 9,60 mL×2 | 9,60 mL×20 |
Formulários
Para amplificação isotérmica de DNA ou RNA.
Condições de armazenamento
Transportado com gelo seco, armazenado a -25~ -15℃.Evite congelamentos e descongelamentos frequentes, o produto tem validade de 12 meses.
Protocolo
1.Descongele o tampão de reação a ser usado em temperatura ambiente.Agite brevemente no vórtice ou inverta os tubos várias vezes para misturar bem e, em seguida, centrifugue para coletar o líquido no fundo do tubo.
2.Preparação do sistema de reação.Este reagente pode ser preparado em dois sistemas de reação, mistura de reação líquida e mistura de sistema liofilizado.
1) Prepare a mistura de reação líquida
| Componente | Volume |
| Tampão de amplificação mediado por loop (com corante) | 10 μL |
| Mistura de enzimas RT | 2,8 μL |
| 10 × Mistura de Primera | 5 μL |
| Modelos DNA/RNA b | × μL |
| Água sem nuclease | Até 50 μL |
2) Mistura do sistema de liofilização
① Prepare a mistura liofilizada
| Componente | Volume |
| Tampão de amplificação mediado por loop (com corante) | 10 μL |
| Protetor liofilizado | 20 μL |
| Mistura de enzimas RT | 2,8 μL |
| Água sem nuclease | Até 50 μL |
② Liofilização: A mistura preparada foi liofilizada em sistema de 50μL
③ Prepare a mistura de reação
| Componente | Volume |
| Mistura liofilizada | 1 pedaço |
| 10 × Mistura de Primera | 5 μL |
| Modelos DNA/RNA b | × μL |
| Água sem nuclease | Até 50 μL |
Notas:
1) uma.Mistura de 10×Primer: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (solúvel em água) é recomendado para modelos de ácidos nucleicos.
1.Incubar a 65°C por 30-45 minutos, que pode ser estendido adequadamente de acordo com o tempo de reação da mudança de cor.
2.A olho nu, o amarelo era positivo e o vermelho era negativo.
Notas
1.Pode aparecer sal no fundo do tubo tampão, agite brevemente no vórtex ou inverta os tubos várias vezes para misturar bem à temperatura ambiente.
2.A temperatura de reação pode ser otimizada entre 62 ℃ e 68 ℃ de acordo com a condição dos primers.
3.Os reagentes embalados não devem ser expostos ao ar durante muito tempo.
4.A reação de descoloração vermelha e amarela depende da mudança de pH do sistema de reação, por favor não use a solução de armazenamento de ácido nucleico contendo Tris, recomendado usar ddH2O ácido nucleico armazenado;
5.O experimento deve ser padronizado, incluindo a preparação do sistema de reação, liofilização e processamento de amostras e processo de adição de amostras;
6.Para evitar contaminação, recomenda-se preparar o sistema de reação em uma bancada ultralimpa, em outros casos, adicionar gabaritos na capela da sala para evitar interferências falso-positivas.
