2×HiF Taq mais Master Mix
Número do gato: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (com corante) é uma solução pré-misturada 2× pronta para uso contendo Plus HIF DNA Polimerase, dNTPs e buffer otimizado.Dois anticorpos monoclonais à temperatura ambiente que inibem a atividade da polimerase e a atividade da exonuclease 3′→5′ são adicionados à mistura principal para uma PCR Hot Start fácil e altamente específica.O fator de extensão é adicionado à mistura principal para dar à enzima uma capacidade de amplificação de fragmentos longos, o comprimento da amplificação pode ser de até 13 kb, a enzima tem uma atividade de DNA polimerase de 5′→3′ e uma atividade de 3′→5′ atividade de exonuclease, sua fidelidade é 83 vezes maior que a da DNA polimerase Taq, que é 9 vezes maior que a da DNA polimerase comum.É adequado para amplificação de modelos complexos, o produto de amplificação é uma extremidade romba.
2×HIF Taq plus Master Mix (com corante) tem as vantagens de ser rápido e fácil, alta sensibilidade, forte especificidade, boa estabilidade, etc., o sistema de reação só precisa adicionar primers e modelos, e pode ser amplificado por dois - protocolo de etapas, simplificando as etapas experimentais e economizando tempo.Este produto contém corantes indicadores de eletroforese e os produtos de PCR podem ser usados diretamente para eletroforese.Além disso, o produto também contém um agente protetor específico, para que a mistura principal possa manter a atividade estável após repetidos congelamentos e descongelamentos.
Condições de armazenamento
Os produtos devem ser armazenados a -25~-15°C por 1 ano.
Especificações
| Especificação do produto | Mistura mestre |
| Concentração | 2× |
| Início quente | Início Quente Integrado |
| Saliência | Cego |
| Velocidade de reação | Rápido |
| Tamanho (Produto Final) | Até 13 KB |
| Condições de transporte | Gelo seco |
| Tipo de Produto | Pré-misturas PCR de alta fidelidade |
Instruções
1.Sistema de reação PCR
| Componentes | Volume (μL) |
| Modelo de DNA | Adequado |
| Primer direto (10 μmol/L) | 2,5 |
| Primer reverso (10 μmol/L) | 2,5 |
| 2×HIF Taq mais Master Mix | 25 |
| ddH2O | para 50 |
2.Uso recomendado de diferentes modelos
| Tipo de modelo | Amplifique fragmentos de 1kb a 10kb |
| DNA genômico | 50ng-200ng |
| Plasmídeo ou DNA viral | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 μL (não exceda 10% do volume final da reação PCR) |
3.Protocolo de Amplificação
1) Protocolo de duas etapas (modelo de complexidade)
| Etapa do ciclo | Temperatura. | Tempo | Ciclos |
| Desnaturação inicial | 98°C | 3 minutos | 1 |
| Desnaturação | 98°C | 10 segundos | 30-35 |
| Extensão | 68°C | 30 seg/kb | |
| Extensão final | 72℃ | 5 minutos | 1 |
2) Protocolo de três etapas (protocolo regular)
| Etapa do ciclo | Temperatura. | Tempo | Ciclos |
| Desnaturação inicial | 98°C | 3 minutos | 1 |
| Desnaturação | 98°C | 10 segundos | 30-35 |
| anelamento | 60°C | 20 segundos | |
| Extensão | 72℃ | 30 seg/kb | |
| Extensão final | 72℃ | 5 minutos | 1 |
3) Protocolo de gradiente de recozimento (modelo de complexidade)
| Etapa do ciclo | Temperatura | Tempo | Ciclos |
| Desnaturação inicial | 98°C | 3 minutos | 1 |
| Desnaturação | 98°C | 10 segundos | 15 (Redução de 1℃ por ciclo) |
| Recozimento gradiente | 70-55℃ | 20 segundos | |
| Extensão | 72℃ | 30 seg/kb | |
| Desnaturação | 98°C | 10 segundos |
20 |
| anelamento | 55℃ | 20 segundos | |
| Extensão | 72℃ | 30 seg/kb | |
| Extensão final | 72℃ | 5 minutos | 1 |
Recursos sob diferentes protocolos de amplificação
| Protocolol | Dois passos | Três etapas | Recozimento gradiente |
| Especificações. | rápido | médio | lento |
| Especificidade | alto | médio | alto |
| Rendimento de PCR | médio | alto | médio |
| Taxa de detecção | alto | médio | alto |
Notas
Por favor, use o EPI necessário, como jaleco e luvas, para garantir sua saúde e segurança!
