Bst 2.0 DNA Polimerase (sem glicerol)
A Bst DNA polimerase V2 é derivada da DNA polimerase I de Bacillus stearothermophilus, que possui atividade de DNA polimerase 5′→3′ e forte atividade de substituição de cadeia, mas nenhuma atividade de exonuclease 5′→3′.A Bst DNA Polimerase V2 é ideal para deslocamento de fita, amplificação isotérmica LAMP (amplificação isotérmica mediada por loop) e sequenciamento rápido.
Componentes
| Componente | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimerase V2 (sem glicerol) (8U/μL) | 0,2 mL | 1ml | 10ml |
| Tampão 10×HC Bst V2 | 1,5ml | 2×1,5 mL | 3×10 mL |
| MgSO4(100mm) | 1,5ml | 2×1,5 mL | 2×10 mL |
Formulários
1. Amplificação isotérmica LAMP
2. Reação de deslocamento único de fita de DNA
3.Sequenciamento genético de alto GC
4. Sequenciamento de DNA em nível de nanograma.
Condição de armazenamento
Transporte abaixo de 0°C e armazenado entre -25°C~-15°C.
Definição de Unidade
Uma unidade é definida como a quantidade de enzima que incorpora 25 nmol de dNTP em material insolúvel em ácido em 30 minutos a 65°C.
Controle de qualidade
1.Ensaio de Pureza Proteica (SDS-PAGE):A pureza da Bst DNA polimerase V2 é ≥99% determinada por análise SDS-PAGE utilizando detecção de Coomassie Blue.
2.Atividade de Exonuclease:A incubação de uma reação de 50 μL contendo um mínimo de 8 U de Bst DNA polimerase V2 com 1 μg de DNA digerido λ -Hind Ⅲ por 16 horas a 37 ℃ não resulta em degradação detectável conforme determinado.
3.Atividade Nickase:A incubação de uma reação de 50 μL contendo um mínimo de 8 U de Bst DNA polimerase V2 com 1 μg de DNA pBR322 por 16 horas a 37°C não resulta em degradação detectável conforme determinado.
4.Atividade RNase:A incubação de uma reação de 50 μL contendo um mínimo de 8 U de Bst DNA polimerase V2 com 1,6 μg de RNA MS2 durante 16 horas a 37°C não resulta em degradação detectável conforme determinado.
5.ADN de E. coli:120 U de Bst DNA polimerase V2 são rastreados quanto à presença de DNA genômico de E. coli usando qPCR TaqMan com primers específicos para o locus 16S rRNA de E. coli.A contaminação do DNA genômico de E. coli é ≤1 cópia.
Reação da LÂMPADA
| Componentes | 25μL |
| Tampão 10×HC Bst V2 | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mm) | 1,5 μL |
| dNTPs (10mM cada) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Verde (25×)a | 1,0 μL |
| Mistura de primerb | 6 μL |
| Bst DNA Polimerase V2 (sem glicerol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Modelo | × μL |
| ddH₂O | Até 25 μL |
Notas:
1) uma.SYTOTM 16 Verde (25×): Conforme necessidade experimental, outros corantes podem ser utilizados como substitutos;
2) b.Mistura de primers: obtida misturando 20 µM de FIP, 20 µM de BIP, 2,5 µM de F3, 2,5 µM de B3, 5 µM de LF, 5 µM de LB e outros volumes.
Reação e Condição
1 × tampão HC Bst V2, a temperatura de incubação está entre 60°C e 65°C.
Inativação por Calor
80 °C, 20 minutos
