Rnase A
A ribonuclease A (RNaseA) é um polipeptídeo de fita simples contendo 4 ligações dissulfeto com peso molecular de cerca de 13,7 kDa.RNase A é uma endorribonuclease que degrada especificamente o RNA de fita simples nos resíduos C e U.Especificamente, a clivagem reconhece a ligação fosfodiéster formada pela 5'-ribose de um nucleotídeo e o grupo fosfato na 3'-ribose do nucleotídeo pirimidina adjacente, de modo que os fosfatos 2,3'-cíclicos são hidrolisados no 3' correspondente 'fosfatos de nucleosídeo (por exemplo, pG-pG-pC-pA-pG é clivado pela RNase A para gerar pG-pG-pCp e A-PG).A RNase A é a mais ativa na clivagem do RNA de fita simples.A concentração de trabalho recomendada é de 1-100 μ G/mL, compatível com vários sistemas de reação.Baixa concentração de sal (0-100 mM NaCl) pode ser usada para cortar RNA de fita simples, RNA de fita dupla e cadeias de RNA formadas por hibridização de RNA-DNA.
No entanto, em alta concentração de sal (≥0,3 M), a RNase A cliva especificamente apenas o RNA de fita simples.
A RNase A é mais comumente usada para remover RNA durante a preparação de DNA plasmídico ou DNA genômico.O fato de a DNase estar ou não ativa durante o processo de preparação pode facilmente afetar a reação.O método tradicional de fervura em banho-maria pode ser usado para inativar a atividade da DNase.Este produto não contém DNase e protease e não requer tratamento térmico antes do uso.Além disso, este produto também pode ser usado em experimentos de biologia molecular, como análise de proteção de RNase e análise de sequência de RNA.
Condições de armazenamento
O produto deve ser armazenado a -25°C~-15°C por 2 anos.
Especificações
| Aparência | Pó |
| Quantidade | 100mg/1g |
| Tipo de Produto | RNase A |
Instruções
Este é um dos métodos comuns para preparar a solução de armazenamento de RNase A.Também pode ser preparadopor outros métodos de acordo com os métodos tradicionais em laboratório ou literatura de referência (comodissolvendo diretamente em solução Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 ou Tris-NaCl)
1. Use acetato de sódio 10 mM (pH 5,2) para preparar 10 mg/mL de solução de armazenamento de RNase A.
2. Aquecimento a 100 ℃ durante 15 min.
3. Resfrie à temperatura ambiente, adicione 1/10 do volume de Tris-HCl 1 M (pH 7,4), ajuste seu pH para 7,4 (parapor exemplo, adicione 500 mL de solução de armazenamento de RNase 10 mg/mL 1 M Tris-HCl, pH 7,4).
4. Subembalado a -20 ℃ para armazenamento congelado, que pode ser estável por até 2 anos.
[Notas]:
Ao ferver a solução RNaseA em condições neutras, a precipitação de RNase se formará;Ferva em pH menor e se houver precipitação pode-se observar, o que pode ser causado pela presença de impurezas proteicas.Se forem encontrados sedimentos após a fervura, as impurezas podem ser removidas por centrifugação de alta velocidade (13.000 rpm) e depois subembaladas para armazenamento por congelamento.
Notas
Por favor, use o EPI necessário, como jaleco e luvas, para garantir sua saúde e segurança.
