Polimerase de DNA Taq selvagem
Taq DNA Polimerase é uma DNA polimerase termoestável de Thermus aquaticus YT-1, que possui atividade de polimerase 5'→3' e atividade de endonuclease de flap 5'.
Componentes
| Componente | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Tampão Taq | 2×1 mL | 2×10 mL | 2×50 mL | 5×200ml |
| Taq DNA polimerase (5 U/μL) | 0,1 mL | 1ml | 5ml | 5×10 mL |
Condição de armazenamento
Transporte abaixo de 0°C e armazenado entre -25°C~-15°C.
Definição de Unidade
Uma unidade é definida como a quantidade de enzima que incorpora 15 nmol de dNTP em material insolúvel em ácido em 30 minutos a 75°C.
Controle de qualidade
1.Ensaio de Pureza Proteica (SDS-PAGE):A pureza da Taq DNA polimerase foi ≥95% determinada por análise SDS-PAGE.
2.EndAtividade de onuclease:Um mínimo de 5 U de Taq DNA polimerase com 1 μg de λDNA por 16 horas a 37 ℃ não resulta em degradação detectável conforme determinado.
3.Atividade de Exonuclease:Um mínimo de 5 U de Taq DNA polimerase com 1 μg de DNA digerido λ -Hind Ⅲ por 16 horas a 37 ℃ não resulta em degradação detectável conforme determinado.
4.Atividade Nickase:Um mínimo de 5 U de Taq DNA polimerase com 1 μg de DNA pBR322 por 16 horas a 37°C não resulta em degradação detectável conforme determinado.
5.Atividade RNase:Um mínimo de 5 U de Taq DNA polimerase com 1,6 μg de MS2 RNA durante 16 horas a 37°C não resulta em degradação detectável conforme determinado.
6.E. coliADN:5 U de Taq DNA polimerase são pesquisadas quanto à presença de DNA genômico de E. coli usando qPCR TaqMan com primers específicos para o locus 16S rRNA de E. coli.A contaminação do DNA genômico de E. coli é ≤1 cópia.
7.Amplificação por PCR (DNA Lambda de 5,0 kb)- Uma reação de 50 µL contendo 5 ng de DNA Lambda com 5 unidades de Taq DNA Polimerase para 25 ciclos de amplificação por PCR resulta no produto esperado de 5,0 kb.
Configuração de reação
| Componentes | Volume |
| Modelo de DNAa | opcional |
| Primer direto de 10 μM | 1 μL |
| Primer reverso 10 μM | 1 μL |
| Mistura dNTP (10mM cada) | 1 μL |
| 10×tampão Taq | 5 μL |
| Polimerase de DNA Taqb | 0,25 μL |
| Água sem nuclease | Até 50 μL |
Notas:
1) A concentração ideal de reação de diferentes modelos é diferente.A tabela a seguir mostra o uso recomendado do modelo do sistema de reação de 50 µL.
| ADN | Quantia |
| Genômico | 1 ng-1 μg |
| Plasmídeo ou Viral | 1 página-1 ng |
2) A concentração ideal de Taq DNA Polimerase pode variar de 0,25 µL a 1 µL em aplicações especializadas.
ReaçãoPrograma
| Etapa | Temperatura(°C) | Tempo | Ciclos |
| Desnaturação iniciala | 95 ℃ | 5 minutos | - |
| Desnaturação | 95 ℃ | 15-30 segundos | 30-35 ciclos |
| anelamentob | 60 ℃ | 15s | |
| Extensão | 72 ℃ | 1kb/min | |
| Extensão Final | 72 ℃ | 5 minutos | - |
Notas:
1) A condição inicial de desnaturação é adequada para a maioria das reações de amplificação e pode ser modificada de acordo com a complexidade da estrutura do modelo.Se a estrutura do modelo for complexa, o tempo de pré-desnaturação pode ser estendido para 5 – 10 minutos para melhorar o efeito de desnaturação inicial.
2) A temperatura de recozimento precisa ser ajustada de acordo com o valor Tm do primer, que geralmente é definido para 3 ~ 5 ℃ menor que o valor Tm do primer;Para modelos complexos, é necessário ajustar a temperatura de recozimento e prolongar o tempo de extensão para obter uma amplificação eficiente.
